배양된 곤충 세포에서 Drosophila C Virus의 바이러스 감염량을 결정하기 위한 분석

양성 단일 가닥 RNA 바이러스인 초파리 C 바이러스(DCV)는 일반적으로 초파리 멜라노가스터를 감염시킵니다.

감염 중에 DCV는 숙주 세포 기계를 사용하여 바이러스 게놈을 복제하고 결국 바이러스 입자를 생성합니다. 감염된 세포는 세포병증 효과인 CPE를 나타내며 분열 불능으로 인해 용해를 겪거나 용해 없이 죽습니다.

평균 바이러스 조직 배양 감염 용량을 결정하기 위해 감염된 세포의 절반이 CPE를 나타내는 DCV 농도는 연속적으로 희석된 DCV 현탁액으로 시작합니다.

천연 DCV 숙주인 Drosophila melanogaster의 말기 배아에서 유래한 반부착성 초파리 S2* 세포를 포함하는 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 배지와 세포를 포함하는 웰은 음성 대조군 역할을 합니다.

바이러스가 세포를 감염시킬 수 있도록 배양합니다. 바이러스에 감염된 세포는 세포 손상 및 사망을 통해 CPE를 나타냅니다. 배양 후 현미경으로 우물을 관찰하십시오.

희석액 전반에 걸쳐 CPE 양성 및 음성 우물을 식별합니다. DCV의 평균 바이러스 조직 배양 감염 용량을 결정하기 위해 적절한 방법을 사용하십시오.

평균 바이러스 조직 배양 감염 용량을 결정하기 위해, 먼저 100마이크로리터의 완전 배지에 1 x 10⁵ S2 스타 세포를 96웰 플레이트의 12행에 있는 컬럼당 8개의 웰에 시드한다. 그런 다음 플레이트를 섭씨 25도 인큐베이터로 되돌립니다.

섭씨 영하 80도의 보관에서 바이러스 튜브 5개를 무작위로 선택합니다. 세포가 침전되는 동안, 10개의 멸균 1.5밀리리터 미세원심분리기 튜브에 450마이크로리터의 멸균 완전 배지를 채우고, 450마이크로리터의 멸균 완전 배지를 포함하는 첫 번째 1.5밀리리터 튜브에 50마이크로리터의 바이러스 스톡을 첨가하고, 현탁액을 12번째 웰에 단계당 10배씩 희석합니다.

배양이 끝나면 각 희석액 50마이크로리터를 해당 바이러스 튜브에 대한 각 컬럼의 적절한 웰에 첨가하고, 바이러스가 없는 배양 배지 50마이크로리터를 컬럼당 1웰에 음성 대조군 웰로 추가합니다. 그런 다음 플레이트를 섭씨 25도 인큐베이터에 3일 동안 넣고 매일 20배 배율의 명시야 현미경으로 각 바이러스 스톡의 세포병증 효과를 평가합니다.

세포가 흐릿하게 보이고 배지가 파편으로 가득 찬 우물을 양성 우물로 분류하고, 세포 형태가 정상인 우물을 음성 우물로 분류합니다.