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면역학
0 조회수 • 2:57 분 • July 8th, 2025
세포내 성분이 방출된 호중구 균질염이 들어 있는 유리관을 가져 가십시오.
지질-지질 및 지질-단백질 상호작용을 방해하는 극성 용매인 메탄올을 첨가합니다. 메탄올의 고유한 극성은 극성 지질을 고르게 분포시켜 가용화합니다. 다음으로, 비극성 유기 용매인 클로로포름을 첨가하여 비극성 지질과 상호 작용하여 분산 및 용해시킵니다.
원심분리하여 지질, 다당류 및 세포 파편을 포함하는 상청액에서 단백질 함유 펠릿을 분리합니다. 상청액을 새 유리관으로 옮깁니다. 클로로포름과 증류수를 첨가하십시오. 샘플을 원심분리합니다.
물 첨가는 자발적으로 이상 시스템을 형성하여 하부 클로로포름과 상부 물-메탄올 층 내에서 생체 분자를 분할합니다.
클로로포름 층은 용해된 비극성 지질로 구성되고, 상층은 비지질 오염 물질과 더 극성 지질을 포함합니다. 지질 함유층을 방해하지 않고 상부 물-메탄올층을 제거합니다.
진공 농축기를 사용하여 지질에서 용매를 제거합니다. 더 이상 사용할 때까지 더 낮은 온도에서 보관하십시오.
인간 말초 혈액 유래 호중구에서 지질을 분리하려면 준비된 호중구를 얼음 위에 놓습니다. PTFE 씰이 있는 15밀리리터 스크류 캡 유리관에 호중구를 피펫팅하고 1분 동안 흔들어 균질화합니다. 그런 다음 메탄올 2밀리리터를 넣고 1분 후에 클로로포름 1밀리리터를 추가합니다. 1분 더 흔든 후 유리관을 실온, 50RPM에서 30분 동안 회전시킵니다.
다음으로, 용액을 섭씨 7도 및 1952배 g에서 10분 동안 원심분리하여 단백질 분획을 펠릿화합니다. 상청액을 새로운 15밀리리터 유리 스크류 캡 튜브에 조심스럽게 디캔팅하고 단백질 함유 펠릿을 남겨둡니다. 향후 정량화를 위해 펠릿을 섭씨 영하 20도에서 보관하십시오.
클로로포름 1밀리리터를 넣고 1분 정도 기다립니다. 그런 다음 이중 증류수 1밀리리터를 넣고 유리 나사 캡 튜브를 샘플과 함께 30초 동안 뒤집습니다. 이전과 같이 샘플을 원심분리한 후 탁한 층을 포함하지 않는 상상을 제거하고 폐기합니다. 샘플을 섭씨 60도의 진공 농축기에서 건조시키고 필요할 때까지 섭씨 영하 20도에서 보관합니다.