중간엽 줄기세포에 의한 대식세포 식세포작용(macrophage phagocytosis)의 조절을 연구하기 위한 분석

선택된 웰에서 중간엽 줄기 세포(MSC)가 있는 멀티웰 플레이트를 채취합니다.

대식세포를 도입하고 배양하여 공동 배양 웰에서 MSC-대식세포 상호 작용을 촉진합니다.

pH에 민감한 형광단에 접합된 효모 세포벽 성분인 자이모산을 모든 웰에 추가합니다.

대식세포 청소제 수용체는 자이모산에 결합하여 식식체 내부로 삼켜지고, 식식체는 리소좀과 융합하여 식식소체를 형성합니다.

파고리소좀 내부의 산성 pH는 형광단이 형광을 방출하게 합니다.

공동 배양 우물에서 MSC는 대식세포와 연결되는 세포질 확장인 터널링 나노튜브(TNT)를 투사합니다. MSC 미토콘드리아는 TNT를 통해 이동하여 대식세포로 들어가 기능적 미토콘드리아의 총 수를 증가시킵니다.

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토콘드리아 수가 증가하면 아데노신 삼인산 또는 ATP의 생성이 증가하여 식균 작용 증가를 위한 에너지 요구량을 촉진합니다.

내재화된 형광단 접합 자이모산으로부터 시간 경과에 따른 형광 강도를 기록합니다.

공동 배양은 대식세포만 있는 웰에 비해 증가된 형광을 나타내며, 이는 MSC 매개 대식세포 식균 작용의 증강을 나타냅니다.

중간엽 줄기 세포를 포함하는 실험 웰에서 배지를 부드럽게 흡인합니다. 다중 채널 마이크로 피펫을 사용하여 플레이트 설계에 따라 적절한 실험 웰에 100마이크로리터의 처리된 대식세포 세포 현탁액과 대조군 대식세포 현탁액을 추가하고 시연된 대로 밤새 배양합니다. 1mg의 자이모산 입자가 들어 있는 바이알에 1ml의 생세포 이미징 배지를 추가하고 배지 입자 혼합물을 유리 배양 튜브에 수집합니다.

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밀리리터의 이미징 용액으로 바이알을 헹군 후 헹구고 헹구는 이미징 매체를 유리관에 옮깁니다. 그런 다음 3밀리리터의 추가 이미징 용액을 추가하여 0.2mg/ml 자이모산 입자 현탁액을 얻습니다. 30-60초 동안 빠른 펄스를 사용하여 자이모산 현탁액을 소용돌이치게 합니다. 그런 다음 프로브 초음파 처리기를 사용하여 60개의 빠른 펄스로 현탁액을 초음파 처리합니다. 배지를 흡인한 후, 시약 블랭크 웰의 실험 웰을 100마이크로리터의 생세포 이미징 용액으로 헹굽니다.

다음으로, 웰에서 살아있는 세포 이미징 용액을 흡인하고 100마이크로리터의 자이모산 현탁액을 추가합니다. 터치패드 인터페이스를 사용하여 형광등 판독기의 플레이트 트레이를 엽니다. 뚜껑이 없는 접시를 왼쪽 상단 모서리에 있는 A1 웰이 있는 트레이에 놓습니다. 터치패드를 사용하여 트레이를 닫고 상단 메뉴에서 녹