쥐 모델에서 Malassezia-Induced Skin Inflammation and Fungal Burden Analysis (말라세지아에 의한 피부 염증 및 곰팡이 부담 분석)

기회 병원성 곰팡이인 말라세지아는 쥐의 표피(가장 바깥쪽 피부층)에 서식합니다. 피부 장벽이 손상되면 표피를 관통하여 염증을 유발할 수 있습니다.

말라세지아로 인한 피부 염증을 평가하려면 귀 피부가 상처를 입어 표피가 파괴된 마취된 마우스를 준비합니다.

귀의 두께를 측정하고 상처 입은 귀에 말라세지아 오일 현탁액을 바르십시오. 오일은 말라세지아가 피부에 흡수되는 데 도움이 되는 반면, 상처는 곰팡이가 표피로 들어가 감염을 일으

킵니다.

표피 내에서 랑게르한스 세포와 각질 세포의 패턴 인식 수용체는 진균 세포벽 구성 요소와 상호 작용합니다. 상호 작용 시 이 세포는 전염증성 사이토카인을 방출하여 진피를 통해 확산되어 진피 혈관을 확장합니다. 이는 감염 부위의 백혈구 침윤과 체액 축적을 촉진하여 조직 부종과 귀의 부종을 유발합니다. 귀의 두께 증가는 염증과 관련이 있습니다.

귀를 해부하고 균질화하여 말라세지아를 포함한 세포내 내용물을 방출합니다. 균질화된 현탁액을 성장 배지와 함께 한천 플레이트에 펴고 배양합니다. 이를 통해 개별 곰팡이가 별개의 군집으로 자랄 수 있습니다.

플레이트의 콜로니 수는 피부 염증으로 인한 곰팡이 부담을 반영합니다.

말라세지아 감염을 시작하려면 마취된 6주에서 8주 된 암컷 C57/Black/6 마우스에서 페달 반사에 대한 반응 부족을 확인하고 동물의 눈에 연고를 바릅니다. 캘리퍼스를 사용하여 양쪽 귀의 서로 다른 두 영역의 두께를 측정하여 귀당 평균 두께를 계산할 수 있습니다. 그런 다음 한쪽 귀 피부에 작은 테이프 조각을 붙인 후 매번 새 테이프를 사용하여 귀 피부에서 테이프를 5번 빠르게 제거합니다.

스트리핑 후 멸균 피펫을 사용하여 말라세지아 올리브 오일 현탁액 100마이크로리터를 각 귀의 등쪽에 바르고 200마이크로리터의 멸균 예열된 2% 포도당 용액을 목덜미에 피하로 주입하여 신진대사와 수분 보충을 지원합니다. 그런 다음 동물을 케이지로 되돌리기 전에 모니터링하면서 30분 동안 가열 패드에서 마우스를 회복시키십시오.

적절한 실험 시점에서 캘리퍼스를 사용하여 각 마우스 귀의 두 가지 다른 영역을 측정하여 귀당 평균 두께를 계산할 수 있습니다. 감염된 피부의 진균 부담을 측정하려면 고압멸균된 직경 5밀리리터 강철 볼에 멸균된 0.05% NP40 마이크로리터 500리터와 증류수를 귀당 2밀리리터 미세 원심분리기 튜브 1개에 넣고 저울에서 각 튜브의 무게를 측정합니다.

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