Mycobacterium tuberculosis를 가진 단핵구 유래 세포의 완전히 분화된 대식세포 감염 모델

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면역학

0 조회수 • 2:36 분 • July 8th, 2025

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멀티웰 플레이트에서 완전히 분화된 대식세포의 배양물을 얻습니다. 이러한 대식세포에는 다양한 미생물 성분을 식별하는 패턴 인식 수용체인 톨 유사 수용체 또는 TLR-2와 같은 표면 마커가 있습니다.

형

광 표지된 Mycobacterium tuberculosis 또는 Mtb 세포 현탁액을 각 웰에 적당량의 첨가하고 배양합니다.

TLR-2는 Mtb 세포벽의 복합 당지질 성분인 리포아라비노만난 또는 LAM을 인식하여 식균작용을 시작합니다. 대식세포는 Mtb를 내재화하여 막에 결합된 구획인 식체 내에 박테리아를 격리합니다.

식체는 리소좀과 융합하여 성숙하여 산성 및 효소가 풍부한 구획인 식체리소좀을 형성합니다.

식식소좀 내에서 Mtb는 산성 pH 생성을 담당하는 액포형 양성자 펌프를 억제합니다. 결과적으로 파고리소좀 내의 pH는 거의 중성이 되어 삼켜진 병원균을 분해하는 효소를 비활성화합니다.

LAM과 TLR2 사이의 상호 작용은 숙주 세포 신호 전달 경로에도 영향을 미쳐 항원 제시에 관여하는 표면 마커의 조절로 이어집니다.

파고리소좀의 비활성화와 숙주 면역 반응의 억제는 Mtb가 대식세포 내에서 지속되고 복제될 수 있도록 합니다.

단핵구 유래 세포를 감염시키기 위해서는, 무혈청 배지에서 박테리아를 밀리리터당 10 내지 6번째 콜로니 형성 단위의 5배로 희석하고, 6웰 세포 배양 플레이트의 각 웰에 있는 상청액을 웰당 1밀리리터의 신선한 무혈청 배지 및 1밀리리터의 박테리아 현탁액으로 대체하여 5의 감염 다중도를 얻는다.

세포 배양 인큐베이터에서 4시간 배양한 후, 세척당 1밀리리터의 멸균 세척 완충액으로 각 웰을 3회 세척하고, 각 세척 후 웰 모서리에서 완충액의 전체 부피를 제거하도록 플레이트를 조심스럽게 기울입니다. 그런 다음 MTb에 감염된 단핵구 유래 세포를 항생제 없이 완전 배지 2밀리리터에 재현탁합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026