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면역학
0 조회수 • 2:55 분 • July 8th, 2025
인간 혈청 당단백질인 비트로넥틴이 박테리아에 미치는 영향을 조사하려면 헤모필루스 인플루엔자 현탁액이 들어 있는 튜브부터 시작합니다.
한 튜브는 비트로넥틴이 함유된 정상 인간 혈청으로 치료하고 다른 튜브는 비트로넥틴 고갈 혈청으로 치료합니다. 두 혈청 변이 모두 살균 활성에 필수적인 항체와 다양한 보체 단백질을 함유
하고 있습니다.배양하는 동안 항체는 박테리아 표면 단백질과 상호 작용하여 보체 단백질을 활성화하여 C5를 절단하는 C5 전환효소를 형성합니다. C5b는 C6과 결합한 다음 C7과 결합하여 C5b6-7 복합체를 형성합니다. 이 복합체는 박테리아 세포막에 결합하고 C8을 모집하여 C5b67-8을 형성합니다.
이 과정은 C9 단량체의 부착과 중합을 촉진하여 기공 형성 구조인 막 공격 복합체를 생성합니다. 이 기공은 이온과 물의 유입을 일으켜 박테리아 용해를 일으킵니다.
대조적으로, 정상 혈청이 있는 튜브에서 비트로넥틴은 C5b6-7 복합체 및 C9 단량체와 상호 작용하는 박테리아 표면 단백질에 결합합니다. 이러한 상호 작용은 C8의 모집과 C9의 중합을 방지하여 막 공격 복합체 형성을 억제하고 박테리아 생존을 유도합니다.
튜브와 개별 한천 플레이트의 배양액에서 박테리아 현탁액을 채취합니다.
비트로넥틴을 함유한 혈청의 더 높은 박테리아 콜로니는 인간 혈청의 살균 활성에 대한 박테리아 내성에서의 역할을 확인합니다.
인간 혈청의 살균 활성에 대한 비트로넥틴 의존성 내성을 분석하기 위해 먼저 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 박테리아를 배양하고 펠릿화합니다. 원심분리 후, 박테리아 펠릿을 1부피의 포도당 젤라틴 베로날 완충액으로 재현탁합니다. 이제 5% 혈청을 함유한 DGVB++ 100마이크로리터에 1,500CFU의 박테리아를 첨가합니다.
샘플을 섭씨 37도에서 15분 동안 배양하고 300RPM으로 흔듭니다. 0분과 15분에 반응 혼합물에서 10마이크로리터 분취량을 제거합니다. 초콜릿 한천에 분취량을 놓고 접시를 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 초콜릿 한천 플레이트를 배양한 후, 플레이트에 나타나는 콜로니를 계산하고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 사멸된 박테리아의 백분율을 계산합니다.