포유류 시스템을 통한 인플루엔자 바이러스 유사 입자 생성 기술

바이러스 유사 입자(VLP)는 바이러스 구조를 모방하지만 바이러스 유전 물질이 부족하여 독성이 없습니다. VLP는 면역 세포가 인식하는 표면 결합 항원 에피토프를 가지고 있어 이상적인 백신 후보입니다.

재조합 인플루엔자 VLP를 생성하려면 진핵 발현 벡터를 사용합니다.

두 벡터에는 인플루엔자 바이러스의 구조 단백질인 헤마글루티닌(HA)과 뉴라미니다제(NA)를 코딩하는 유전자가 포함되어 있습니다. 세 번째 벡터에는 인간 면역결핍 바이러스의 핵심 단백질을 암호화하는 개그 유전자가 포함되어 있습니다.

양이온성 지질 기반 형질감염 시약을 추가합니다. 양전하를 띤 지질 헤드 그룹은 음전하를 띤 DNA와 상호 작용하여 벡터 주위에 이중층을 형성하여 리포솜 형질감염 복합체를 생성합니다.

VLP 생산에 적합한 배양된 포유류 숙주 세포에 복합체를 첨가하고 배양합니다. 형질감염 복합체는 엔도사이토시스(리포솜 막이 엔도좀 막과 융합하여 벡터를 세포질로 방출하는 엔도사이토시스)를 통해 세포에 들어갑니다.

벡터는 핵에 들어가 바이러스 유전자의 발현을 유도합니다. 소포체에서 HA 및 NA 합성 시 단백질은 분비 경로를 통해 원형질막으로 이동합니다.

핵심 단백질은 세포질에서 합성되고 조립 부위로 운반되어 원형질막에 고정됩니다. 축적된 바이러스 성분은 숙주 세포에서 VLP와 새싹으로 자가 조립됩니다.

다운스트림 처리를 위해 릴리스된 VLP를 수집합니다.

형질감염 당일, 제조사의 권장 사항에 따라 리포좀 및 DNA 용액을 준비합니다. HA:NA:Gag의 DNA 조성이 1:1:2이고 T-150 플라스크당 총 DNA 양이 40마이크로그램인 DNA 세포를 형질감염시킵니다. 이 단계를 반복하여 총 부피 200밀리리터에 대해 9개의 T-150 플라스크를 만듭니다.

다음으로, 항생제 없이 무혈청 형질감염 배지에서 DNA 및 리포좀 용액을 희석하여 각 플라스크에 총 부피가 24밀리리터가 포함되도록 합니다. 플라스크를 인큐베이터로 되돌리고 바이러스 유사 입자 또는 VLP가 수확되는 날까지 형질감염 배양 배지에 세포를 유지합니다.

상청액을 15밀리리터 원뿔형 튜브로 옮겨 형질감염 후 72-96시간 후에 세포에서 배양액을 수확합니다. 세포를 아래로 돌려 세포 파편을 펠릿화합니다. 상청액을 수집하고 0.22미크론 기공막을 통해 여과합니다.