감염 후 포도막염을 연구하기 위한 프라이밍 마이코박테리아 포도막염의 쥐 모델

전신 세균 감염에 따른 만성 안구 염증 또는 포도막염을 감염 후 포도막염이라고 합니다.

감염 후 포도막염 모델을 생성하려면 이전에 열사멸 결핵균 또는 Mtb로 예방접종된 마취된 마우스를 취합니다. 프라이밍(면역원에 대한 사전 노출)은 순환하는 Mtb 특이적 T 세포를 생성합니다.

동일한 면역원을 눈의 유리체강에 주입합니다. 마이코박테리아는 유리체액을 통해 확산되어 눈 전체로 퍼집니다. 안구 혈액 장벽은 면역 세포가 눈으로 들어가는 것을 제한하여 면역 특권 기관이 됩니다.

혈관 주위 영역의 조직 상주 항원 제시 세포 또는 APC는 확산된 면역원을 만납니다. 면역원을 내재화하면 APC는 Mtb 항원을 처리하고 주요 조직적합성 복합체 또는 MHC를 통해 표면에 표시합니다.

활성화된 APC는 또한 혈관에서 내피 긴밀 접합 장벽의 투과성을 유발하는 전염증성 사이토카인을 방출합니다. 호중구 및 Mtb 특이적 T 세포를 포함한 백혈구는 혈관주위 공간으로 혈관 밖으로 유출됩니다.

Mtb 특이적 T 세포는 APC의 항원에 결합하고 전염증성 사이토카인을 방출하여 호중구가 활성 산소종(ROS)을 생성하도록 유도하고 탈과립을 유발합니다.

방출된 입상 프로테아제와 ROS는 조직 실질의 분해와 안구-혈액 장벽의 파괴를 일으켜 염증을 악화시킵니다.

감염 모델은 다운스트림 분석을 위한 준비가 되었습니다.

주사 당일에는 전신마취의 깊이를 확인한 후 0.5% 테트라카인 1방울로 각막을 마취하고 2.5% 페닐에프린 1방울로 동공을 확장합니다. 여분의 액체를 두드린 후 5% 베타딘 한 방울을 눈 표면과 주변 모발에 떨어뜨려 안내염의 위험을 줄입니다.

2-3분 후 베타딘을 제거하고 0.3% 하이프로멜로스 젤로 눈을 덮어 마취 시 건조함과 백내장 형성을 방지합니다. 다음으로, 10마이크로리터 주사기에 항원과 플루오레세인 혼합물을 넣습니다. 그런 다음 마우스를 플랫폼에 엎드린 자세로 놓고 오른쪽 및 왼쪽 이어바를 사용하여 마우스 헤드를 고정합니다.

오른쪽 눈의 위쪽 비강 측면이 보이도록 스코프 아래에 마우스를 배치하고 방향을 지정합니다. 그런 다음 30게이지 바늘을 사용하여 속눈썹을 옮기고 공막을 노출시킨 다음 윤부와 요골 혈관을 시각화합니다.

다음으로, 멸균 30게이지 바늘을 사용하여 윤부에서 1-2mm 뒤쪽 공막에 가이드 구멍을 만듭니다. 그런 다음 주사 홀더에 부착된 34게이지 바늘을 가이드 구멍을 통해 렌즈를 피하는 각도로 눈에 삽입하되 바늘 끝을 유리체강에 넣습니다.

마이크로 주사기 펌프 컨트롤러를 사용하여 결핵균 추출물 1마이크로리터를 유리체강에 조심스럽게 주입합니다. 지속적인 역류의 경우 적절한 용량 전달을 보장하기 위해 주사량을 1.5마이크로리터로 늘리십시오. 눈의 녹색 반사를 시각화하여 유리체강내 배치를 확인하고 10초 후에 눈에서 바늘을 제거합니다.