0 조회수 • 3:41 분 • July 8th, 2025
산소와 마취 가스가 지속적으로 흐르는 호흡 장치에 부착된 멸균 수술 패드에 마취된 마우스를 놓습니다.
필터를 사용하여 주사기에 멸균 공기를 넣으십시오. 주사기에 바늘을 부착하고 멸균된 공기를 마우스 뒷면에 피하로 주입하여 조직층 내에 공기 주머니를 만듭니다. 회복될 때까지 마우스를 모니터링합니다.
마우스를 재마취하고 지질다당류, LPS를 에어 포우치에 투여합니다. LPS는 조직 상주 대식세포 및 수지상 세포의 톨 유사 수용체 4, TLR-4에 결합하여 활성화합니다.
활성화된 세포는 호중구 및 기타 면역 세포를 끌어당기는 사이토카인 및 케모카인과 같은 다양한 염증 매개체를 방출합니다. 이러한 매개체는 또한 주변 혈관의 혈관 투과성을 증가시켜 면역 세포와 가용성 인자가 혈류에서 공기 주머니로 들어갈 수 있도록 합니다.
체액이 주머니 내에 축적되면서 염증 세포와 다양한 생리 활성 분자로 구성된 삼출물을 형성합니다.
마우스를 안락사시키고 적절한 세척 완충액을 에어 파우치에 주입합니다. 염증성 삼출물을 미세 원심분리기 튜브와 원심분리기에 모으십시오. 상청액을 버리고 세포를 세척 완충액에 재현탁합니다.
염증성 삼출물을 분석하여 호중구 비율을 정량화하고 침윤 정도를 결정합니다.
0일째에 마우스를 마취한 후, 5밀리리터 주사기에 부착된 0.22미크론 필터를 사용하여 3밀리리터 부피의 멸균된 공기를 얻습니다. 핀셋으로 마취된 마우스의 뒷피부를 들어 올리고 26게이지 x 3/8인치 바늘을 피하로 사용하여 멸균된 공기 3밀리리터를 주입합니다.
치료 후 생쥐를 호흡 장치에서 꺼내 잘 놓인 케이지에 넣습니다. 쥐가 움직이기 시작할 때까지 살아 있는지 모니터링하십시오. 셋째 날에는 에어 파우치를 유지하기 위해 이전에 설정된 에어 포켓에 멸균된 공기 3밀리리터를 추가로 주입합니다.
6일째에는 에어 파우치에 다양한 트리트먼트를 주입합니다. 음성 대조군으로 PBS 1밀리리터를 주입하고, 양성 대조군으로 LPS당 1마이크로그램 1밀리리터를 주입하여 국소 염증을 유발합니다. 6시간 후에 쥐를 희생하십시오.
각 에어 파우치에 대해 1밀리리터의 세척 완충액을 주입하여 에어 파우치를 세척하고 염증성 삼출물을 15밀리리터 원심분리기 튜브에 수집합니다. 그런 다음 2밀리리터의 세척 완충액으로 에어 파우치를 두 번 세척하고 동일한 원심분리기 튜브에 염증성 삼출물을 수집합니다.
실온에서 100 x g에서 10분 동안 원심분리합니다. 상청액을 버리고 세포를 1밀리리터의 세척 완충액에 재현탁합니다. 자동 혈액학 분석기를 사용하여 세포를 계수하여 호중구 비율을 정량화합니다.