생체 외 장기 배양에서 박테리아 감염 모델을 확립하는 기술

세포외 기질(ECM)에서 성장한 인간 태반 장기 배양물을 섭취하십시오.

배양은 외부 세포융합체(다핵 영양막층)와 ECM에 고정하는 융모외 영양막(EVT)으로 분화하는 기본 세포영양막(CBT)이 있는 융모와 같은 구조를 나타냅니다.

병원성 박테리아인 Listeria monocytogenes를 소개합니다.

박테리아 표면 단백질인 내날린은 EVT 수용체에 결합하여 엔도사이토시스를 통해 박테리아 내재화를 촉진합니다.

내면화된 박테리아는 액포막을 천공하는 기공 형성 독소와 포스포리파제를 분비하여 액포막의 파열과 세포질로의 박테리아 탈출을 매개합니다.

탈출한 박테리아는 액틴 중합을 위해 숙주 기계를 모집하여 숙주 세포막을 향해 추진합니다.

박테리아 독성 인자의 분비는 숙주막에 돌출 형성을 유도합니다. 인접한 세포가 박테리아가 포함된 돌출부를 삼켜 감염 확산을 일으킵니다.

박테리아는 EVT를 통해 기본 CBT로 퍼집니다.

항생제를 추가하여 세포외 박테리아를 제거하고 분석을 위한 감염 모델을 준비합니다.

감염을 시작하기 전에 줄무늬가 있는 뇌-심장 주입 한천 플레이트에서 단일 L. monocytogenes 콜로니를 3밀리리터의 뇌-심장 주입 국물에 접종합니다. 박테리아 성장이 고정 단계에 도달할 수 있도록 섭씨 30도의 비스듬한 위치에서 배양액을 밤새 배양합니다.

다음날 아침, 멸균 핀셋을 사용하여 세포외 기질에 침범하지 않은 부유 장기 배양 조각을 제거하고 각 트랜스웰의 바닥에서 배지를 조심스럽게 흡인합니다. 다음으로, 따뜻한 PBS 1밀리리터를 상부 및 하부 트랜스웰에 두 번 부드럽게 피펫팅하고 조심스럽게 흡인하여 각 세척액을 제거합니다.

두 번째 세척 후, 장기 배양을 방해하지 않도록 주의하면서 적절한 배지 1밀리리터를 상부 및 하부 트랜스웰에 부드럽게 피펫팅하고 배양액을 인큐베이터로 1시간 동안 되돌립니다.

배양이 끝나면 트랜스웰 상단의 배지를 1밀리리터의 접종물로 교체하고 박테리아 침입을 촉진하기 위해 플레이트를 세포 배양 인큐베이터에 다시 넣고 매일 각 웰의 모든 배지를 교체합니다.