말라리아-HIV 동시 감염의 체외 세포 배양 모델 생성

인간 말초 혈액 단핵 세포 또는 인간 면역결핍 바이러스 또는 HIV 감염 기증자에서 파생된 PBMC를 포함하는 멀티웰 플레이트로 시작합니다.

PBMC에는 프로바이러스 DNA가 통합된 HIV 감염 CD4 양성 T 세포를 포함한 다양한 면역 세포가 포함되어 있습니다.

생충 유래 항원을 발현하는 열대열원충 기생 적혈구 또는 PfRBC와 감염되지 않은 적혈구의 혼합물로 웰을 파종합니다.

배양하는 동안 PfRBC의 항원은 면역 세포의 수용체와 상호 작용하여 면역 세포를 활성화하고 사이토카인을 방출합니다.

이러한 사이토카인은 CD4 T 세포에서 다운스트림 신호 전달을 유발하여 HIV 프로바이러스 DNA의 전사와 새로운 바이러스 RNA의 합성을 시작합니다.

바이러스 RNA와 HIV 단백질은 싹이 트는 바이러스 입자를 형성하여 새로운 CD4 T 세포를 감염시키고 HIV 감염을 확산시킵니다.

진행성 HIV 감염은 사이토카인 분비를 방해하여 PfRBC에 대한 면역 반응을 손상시키고 지속적인 말라리아 감염을 유발합니다.

시간이 지남에 따라 감염된 적혈구는 새로운 적혈구를 침범하는 기생충을 방출하여 말라리아 기생충을 증식시키고 말라리아-HIV 동시 감염 세포 배양 모델을 확립합니다.

동시 감염 배양을 설정하려면 웰당 100마이크로리터의 RPMI-S+에 새로 분리된 HIV 양성 및 HIV 음성 PBMC 1 x 10⁶을 24웰 플레이트에 파종하는 것으로 시작합니다. 400마이크로리터의 RPMI-S+를 사용하여 각 웰의 총 부피를 최대 500마이크로리터로 가져옵니다.

그런 다음, 웰당 총 부피 500마이크로리터를 3회 및 총 부피로 HIV 감염 및 HIV 감염되지 않은 세포에 3 x 10⁶ 감염되지 않은 적혈구 또는 3 x 10⁶ 기생 적혈구를 첨가합니다. 동시 감염 플레이트를 세포 배양 인큐베이터에 넣습니다.

그런 다음 적절한 실험 기간 후에 세포를 펠릿화하고 각 웰에서 700마이크로리터의 배양 상청액을 수집합니다. 상층액을 원심분리하여 잔해물을 제거합니다. 그런 다음 샘플을 적절하게 분취합니다. 튜브에 라벨을 붙이고 나중에 분석할 수 있도록 섭씨 영하 20도 이하에서 동결합니다.