동종 골수 및 비장 세포 이식을 통한 마우스 모델에서 이식편 대 숙주 질환 유도

숙주 면역 체계를 억제하기 위해 이전에 조사된 마취된 수혜자 마우스로 시작합니다.

동종 줄기 세포 이식을 모방하기 위해 유전적으로 다른 기증자 마우스로부터 조혈 줄기 세포를 얻습니다.

마그네틱 비드를 사용하여 기증자 T 세포를 제거합니다.

이 T 세포 고갈된 현탁액을 수혜자 마우스의 안구후 공간에 주입합니다.

이식된 세포는 혈류로 들어가 골수 혈관으로 이동하고 접착 분자를 사용하여 틈새로 들어가 조혈을 시작합니다.

동종 기증자 마우스의 비장 T 림프구를 수혜자의 안구후 공간에 주입하여 면역 교차 반응성을 유도합니다.

이러한 동종 반응성 T 세포는 다양한 조직으로 이동합니다.

T 세포 표면 수용체는 수용자 세포 항원에 결합하여 이를 이물질로 인식합니다.

이는 T 림프구 내에서 일련의 신호 전달 이벤트를 유발하여 활성화로 이어집니다.

활성화된 T 세포는 숙주 조직을 집단적으로 손상시키는 추가 면역 세포의 모집을 특징으로 하는 염증 캐스케이드를 유발하여 이식편대숙주병의 발병으로 이어집니다.

수혜자 BALB/c 마우스의 전신 조사 1일 후, CD45.1/Ly5.1 B6을 배치합니다. SJL 기증자 마우스를 깨끗한 작업 칼집 위에 엎드린 자세로 만들고 Semken 집게의 13cm 구부러진 톱니 모양 끝 하나를 사용하여 한쪽 아킬레스건에서 털을 들어 올립니다.

끝이 곧은 8.5cm 가는 가위를 사용하여 집게와 한쪽 발뒤꿈치 사이의 피부를 절개하고 절개 부위를 두개골로 늘려 뒷다리의 피부와 털을 쉽게 제거합니다. 뒷다리에서 피부를 제거한 후 각 엉덩이, 발목 및 무릎 관절을 절단합니다.

모든 뒷다리의 허벅지와 정강이를 얼음 위의 PBS로 채워진 단일 92mm 페트리 접시에 보관하고 각 뼈에서 가능한 한 많은 근육을 조심스럽게 제거하고 청소된 각 대퇴골과 경골을 젖은 얼음 위의 멸균 RPMI 1640 배지의 50밀리리터 튜브로 옮깁니다.

골수를 분리하려면 신선한 RPMI 1640 배지로 채워진 새로운 92mm 페트리 접시에 한 번에 하나의 뼈를 옮기고 메스를 사용하여 각 뼈의 끝을 잘라냅니다. 다음으로, 26게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기를 사용하여 한 번에 1밀리리터의 신선한 배지로 뼈를 5밀리리터의 배지가 들어 있는 50밀리리터 수집 튜브에

세척합니다.

모든 뼈를 씻어내면 부서지기 쉬운 골수 조각을 위아래로 여러 번 부드럽게 피펫팅하여 단일 세포 현탁액을 생성합니다. 40마이크로미터 메쉬 스크린 세포 스트레이너를