벼 식물 잎에 곰팡이 감염을 일으키기 위한 스프레이 접종 기술

건조를 방지하기 위해 젖은 여과지 위에 쌀 잎 부분이 있는 페트리 플레이트를 가져 가십시오.

병원성 곰팡이 Magnaporthe grisea의 분생자(생식 포자)의 현탁액을 가져 가십시오. 잎 부분에 뿌리고 어둡고 습한 조건에서 배양합니다.

수분은 분생포생자가 점액을 방출하도록 유도하여 잎 표면에 부착을 촉진합니다.

분포자는 생식관을 확장하며, 그 끝은 돔 모양의 압착체로 분화됩니다.

압착체 내부의 높은 용질 농도는 팽압을 생성하여 침투 못을 형성합니다.

못의 작은 직경은 작은 잎 영역에 팽압 매개 힘을 집중시켜 잎 세포로 침투시킵니다.

말뚝은 영양을 얻기 위해 침습성 균사로 분화합니다.

곰팡이 성장을 위해 형광등 아래에서 잎 부분을 배양합니다.

균사는 감염된 세포 내에서 분기되고 원형질을 통해 인접 세포를 침범합니다.

곰팡이는 독소를 분비하여 괴사를 유도하여 잎 병변을 일으킵니다. 감염 중증도를 평가하기 위해 병변에 점수를 매깁니다.

멸균 수술용 가위를 사용하여 여과지 3겹을 8cm 원으로 자릅니다. 여과지 원을 100mm 멸균 플라스틱 접시 위에 놓습니다. 여과지를 담글 수 있을 만큼의 증류된 탈이온수를 각 접시에 첨가하십시오. 그런 다음 각 배양 접시에 멸균 이쑤시개 2-3cm 간격으로 두

개를 놓습니다.

파종 2주 후 벼의 잎을 줄기 아래쪽 부분을 잘라 모아주세요. 온도 조절 인큐베이터를 사용하여 M. grisea 균주를 섭씨 25도의 OTA 플레이트에서 4일 동안 배양합니다. 그런 다음 피펫을 사용하여 각 플레이트에 증류된 탈이온수 2밀리리터를 추가합니다. 접종 루프를 사용하여 야생형 및 돌연변이 균주에서 균사체 파편으로 균사체를 긁어냅니다.

균사체 파편을 수집하여 새 OTA 플레이트로 옮깁니다. 그런 다음 깨끗한 벤치에서 균사체 파편을 말리십시오. 배양된 균사체 접시에 증류된 탈이온수 2ml를 넣고 멸균 면봉을 사용하여 분생자를 부드럽게 긁어냅니다. 두 겹의 렌즈 종이를 통해 분생자 현탁액을 걸러내고 현탁액을 새 50밀리리터 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 튜브를 5,000배g에서 5분 동안 원심분리합니다.

원심분리 후 상층액을 제거하고 펠릿을 Tween 20 용액으로 재현탁하여 밀리리터당 20,000 분생자의 농도를 얻습니다. 서스펜션을 휴대용 분무기에 붓습니다. 그런 다음 약 10밀리리터의 분생자 현탁액을 2주 된 벼의 잎에 뿌립니다. 대조군 식물의 잎에 Tween 20 용액을 뿌립니다.

그런 다음