실험 화합물을 투여하기 위한 성인 제브라피쉬의 구강 삽관

멸

균 구강 삽관 장치에 나노 구조의 사이토카인 포함체(실험용 나노입자)의 현탁액을 로드하는 것으로 시작합니다.

공복 마취된 제브라피쉬를 축축한 플라스틱 트레이에 놓습니다.

물고기를 안정적으로 잡고 구강 삽관 장치에 부착된 피펫 팁을 사용하여 부드럽게 입을 벌립니다.

바늘을 물고기의 입을 통해 식도 아래로 조심스럽게 삽입합니다.

피펫 팁이 아가미를 통과하고 약간의 저항이 발생하면 더 이상 삽입하지 마십시오.

나노입자를 물고기에 부드럽게 주입합니다.

주입 시 이 사이토카인 나노입자는 제브라피쉬의 소화관을 감싸고 있는 상피 세포와 직접 접촉합니다.

이 세포는 엔도사이토시스를 통해 나노입자를 내면화합니다.

상피 세포 내에서 소포는 세포내 처리를 거쳐 사이토카인 나노입자를 방출합니다.

이러한 사이토카인 나노입자는 밑에 있는 결합 조직으로 나가 상주 면역 세포와 상호 작용하고 세포 내 신호 전달 이벤트를 유발하여 사이토카인 구동 면역 반응을 일으

킵니다.

1게이지 루어락 바늘에 약 31cm의 미세한 실리콘 튜브를 놓습니다. 멸균 10마이크로리터 필터 피펫 팁을 자르고 더 미세한 끝을 가져와 실리콘 튜브 위에 칼집으로 놓습니다.

시작하려면 바늘 장치를 100마이크로리터 루어락 주사기에 부착합니다. 먼저 실험 하루 전에 물고기를 실험 수조로 옮깁니다. 준비된 나노입자 용액을 잘 소용돌이치고 원하는 부피의 현탁액을 끌어올립니다. 물고기를 안전하게 마취한 후 그물을 사용하여 물고기를 젖은 플라스틱 트레이로 빠르게 옮깁니다.

동물이 바늘을 향하도록 수평으로 향하게 합니다. 한 손으로 물고기를 조심스럽게 받치고 보호된 바늘로 입을 벌린 다음 입 입구에서 약 1cm 정도 식도 아래로 바늘을 부드럽게 삽입합니다.

바늘이 어디까지 가야 하는지 알기 어렵고 이것은 연습의 문제입니다. 바늘이 멈출 때 바늘을 느낄 수 있고, 바늘을 조작하여 장치를 조금 더 삽입할 수 있는 올바른 각도를 찾을 수 있습니다.

나노입자 현탁액을 물고기에 천천히 주입하여 현탁액이 아가미나 입을 통해 바깥쪽으로 흐르지 않도록 합니다. 그런 다음 바늘을 부드럽게 제거하고 생선을 회수 탱크에 넣으십시오. 물고기가 회복되는 동안 물고기에 이상이 있는지 모니터링하십시오. 물고기가 회수되면 실험 수조 중 하나로 되돌립니다.