표적 항원에 대한 혈청 항체를 검출하기 위한 Hemagglutination Inhibition Assay

V자형 바닥 멀티웰 플레이트로 시작하여 인플루엔자 특이 항체를 함유한 인플루엔자 백신 접종 인간의 희석된 혈청을 테스트 웰에 추가합니다.

인

플루엔자 특이 항원인 바이러스 혈구응집소를 테스트 및 대조군 웰에 도입합니다.

배양하는 동안 테스트 우물에서 인플루엔자 특이 항체가 항원과 상호 작용하여 복합체를 형성합니다. 대조군 우물에 있는 동안 항원은 결합되지 않은 상태로 유지됩니다.

조류 적혈구 또는 적혈구와 함께 우물을 배양합니다.

대조군 우물에서 유리 항원은 바이러스 혈구응집소에 특이적인 적혈구의 표면 수용체와 상호 작용하여 적혈구가 뭉쳐지게 하여 혈구응집을 일으키고 우물 바닥에 조밀한 패턴을 형성합니다.

그러나 검사 우물에서는 항원-항체 복합체의 존재와 유리 항원의 부재로 인해 혈구응집이 억제되어 적혈구가 바닥에 침전됩니다.

분석 후 플레이트를 기울입니다. 컨트롤 웰은 흐릿한 모양의 작고 조밀한 원형 패턴을 나타내며 이는 혈구응집을 나타냅니다.

대조적으로, 이 검사는 눈물과 같은 확산 패턴을 보여 혈구응집 억제를 시사합니다.

96웰 마이크로타이터 플레이트에 적절한 실험 정보를 라벨링하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 플레이트를 수직 방향으로 돌리고 다중 채널 피펫을 사용하여 하단 백 적정 행의 첫 번째 웰을 제외한 모든 웰에 25마이크로리터의 PBS를 추가합니다. 50마이크로리터의 새로 준비된 관심 항원 용액을 역적정 행의 첫 번째 웰에 추가한 다음 25마이크로리터의 RDE 처리 혈청 샘플을 상위 10행의 첫 번째 웰에 추가합니다.

양성

대조군으로 11번째 행의 첫 번째 웰에 25마이크로리터의 적절한 항혈청을 추가합니다. 그런 다음 각 행의 첫 번째 웰에서 연속적인 웰로 25마이크로리터를 옮겨 연속적인 2배 희석을 수행합니다. 각 희석 단계에 대해 위아래로 10-15회 피펫팅하고 마지막 웰에서 마지막 25마이크로리터를 버립니다.

다음으로, 1행 내지 11행의 각 웰에 25마이크로리터의 항원 용액을 추가하고, 역적정행의 각 웰에만 25마이크로리터의 PBS를 첨가한다. 접시의 네 면을 모두 10번 조심스럽게 두드려 섞은 후 접시를 덮어 실온에서 30분간 둡니다. 배양이 끝나면 각 웰에 50마이크로리터의 적혈구 용액을 추가하고 플레이트를 더 두드리면서 혼합합니다. 그런 다음 플레이트를 다시 덮고 표에 설명된 대로 사용된 종에 따라 적혈구를 배양합니다.

적혈구를 플레이트에 추가한 후 분석에 사용된 혈액 유형에 적합한