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면역학
0 조회수 • 4:31 분 • July 8th, 2025
부착성 대식세포 배양으로 시작합니다.
전염증성 사이토카인을 추가합니다.
사이토카인은 대식세포 표면 수용체에 결합하여 일련의 염증 사건을 시작합니다.
첫째, 사이토카인 신호 전달은 항균 펩타이드의 생산을 유발합니다.
동시에, 대식세포 핵 내의 염색질은 축합 해제를 겪습니다.
이 과정은 막 구성의 변화와 결합되어 핵막을 파괴하여 응축되지 않은 염색질을 세포질로 방출합니다.
세포질에서 항균 펩타이드는 방출된 염색질과 상호 작용합니다.
사이토카인 신호 매개 세포막 투과화는 응축되지 않은 염색질을 세포외 공간으로 방출하여 대식세포 세포외 트랩(MET)을 형성합니다.
이러한 거미줄과 같은 구조는 DNA, 히스톤, 항균 분자 및 효소로 구성됩니다.
세포외 트랩에서 노출된 DNA에 선택적으로 결합하는 형광 핵산 염료인 SYTOX green을 추가합니다.
형광 현미경에서 MET는 자극된 대식세포에서 방출된 세포외 DNA의 녹색 줄무늬로 나타납니다.
멸균 조건에서 완전한 RPMI 1640 배지에 대한 MET 방출의 다양한 자극제를 포함하는 배양 배지를 준비합니다. 차아염소산 자극 실험의 경우 섭씨 37도로 예열된 HBSS가 있는 Falcon 튜브에 200마이크로몰 차아염소산을 준비합니다.
분극 처리 후, 각 웰에서 세포 배지를 흡인하고 PMA, TNF-알파 및 인터루킨-8 자극을 위한 멸균 PBS 또는 차아염소산 자극을 위한 HBSS의 1밀리리터 분취량으로 세포를 조심스럽게 세 번 세척합니다.
최종 세척 단계에서 PBS를 제거한 후 PMA, TNF-알파 또는 인터루킨-8을 함유한 완전 배지 1밀리리터를 추가합니다. TNF-알파 자극의 경우 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%에서 세포를 세포 인큐베이터에서 6시간, PMA 또는 인터루킨-8 자극의 경우 24시간 동안 배양합니다.
차아염소산 실험의 경우 최종 세척 단계에서 HBSS를 제거한 후 새로 준비된 차아염소산 1밀리리터를 추가합니다. 그런 다음 세포 인큐베이터에서 5% 이산화탄소가 있는 상태에서 섭씨 37도에서 세포를 15분 동안 배양합니다. 그 후, 세포 상청액을 조심스럽게 흡인하고 HBSS 1밀리리터 분취량으로 세포를 세 번 세척합니다.
최종 세척 단계에서 HBSS를 제거한 후 1밀리리터의 완전 RPMI 1640 배양 배지를 추가합니다. 그런 다음 세포 인큐베이터에서 5% 이산화탄소가 있는 상태에서 섭씨 37도에서 24시간 동안 세포를 배양합니다.
HBSS에서 40마이크로몰
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