0 조회수 • 3:35 분 • July 8th, 2025
독성이 있는 황색포도상구균과 덜 독성이 있는 황색포도상구균 균주를 복용하십시오.
박테리아를 옵소나이즈하기 위해 혈청을 첨가하십시오.
증가하는 박테리아 농도를 호중구를 포함하는 냉각된 멀티웰 플레이트 웰로 옮깁니다. 낮은 온도는 호중구 활성화를 방지합니다.
동기화된 식균 작용을 촉진하기 위한 원심분리기.
호중구 수용체는 옵소닌에 결합하여 박테리아가 포지체로 내재화되는 것을 촉발합니다.
독성 박테리아에서 식성 환경은 세포용해 독소의 발현을 유발합니다.
이러한 독소는 모공을 형성하여 식체를 방해하고 호중구 막 무결성을 손상시킵니다.
그러나 덜 독성이 있는 박테리아는 감소된 세포용해 독소 발현을 나타냅니다.
배양 후, 호중구를 분리하고 형광 요오드화 프로피듐(PI) 염료가 들어 있는 유세포 분석기 튜브로 옮깁니다.
염료는 손상된 막과 함께 호중구에 들어가 DNA를 염색합니다.
유세포 분석기를 사용하여 PI 염색을 위해 호중구를 분석합니다.
독성이 낮은 균주와 비교하여 독성 균주의 식균 후 PI 양성 호중구 비율의 농도 의존적 증가는 호중구에 대한 독성 균주의 세포독성을 나타냅니다.
계대배양된 황색포도상구균이 중간 기하급수적 성장에 도달하면 배양된 박테리아 1밀리리터를 1.5밀리리터 미세원심분리관에 옮기고 실온에서 5000g에서 5분간 원심분리한다. 펠릿을 방해하지 않고 상청액을 흡인하여 S. aureus를 세척하고 펠릿화된 박테리아를 1밀리리터 DPBS에 재현탁합니다. 샘플을 30초 동안 소용돌이치게 합니다. 샘플을 실온에서 5분 동안 5000g에서 원심분리합니다.
황색포도상구균을 옵소니제화하려면 먼저 박테리아 펠릿을 20% 인간 혈청 1밀리리터에 재현탁합니다. 그런 다음 샘플을 섭씨 37도에서 15분 동안 교반하면서 배양합니다. 앞서 살펴본 바와 같이 원심분리 후 옵소화된 황색포도상구균을 세척합니다. 옵소니화된 황색포도상구균 균주를 얼음처럼 차가운 RPMI로 1 x 108 콜로니 형성 단위, 밀리리터당 CFU로 희석합니다. 샘플을 30초 동안 소용돌이치고 얼음 위에 놓습니다.
한천에 박테리아의 1-10 연속 희석액을 도금하여 이러한 분석에 사용되는 황색포도상구균의 농도를 확인합니다. 1.14단계의 얼음 위의 96웰 플레이트에서 PMN에 양성 및 음성 대조군에 대해 각 황색포도상구균 균주 또는 RPMI의 웰당 100마이크로리터를 부드럽게 추가합니다. 우물에 황색포도상구균을 분포시키기 위해 접시를 부드럽게 흔듭니다.
플레이트를 섭씨 4도에서 8분 동안 500g에서 원심분리하여 식균작용을 동기화하고, 원심분리 직후 시간 0으로 플레이트를 섭씨 37도에서 배양합니다. 원하는 시점에서 플레이트를 얼음 위에 놓고 1마이크로리터의 요오드화프로피듐을 함유한 얼음처럼 차가운 DPBS 200마이크로리터를 각 유세포 분석 튜브에 첨가한 다음 샘플을 해당 튜브로 옮깁니다.