JoVE 실험 백과사전
면역학
0 조회수 • 5:26 분 • July 8th, 2025
Mycobacterium tuberculosis를 포함하는 에어로졸 방울에 마우스를 노출시킵니다.
박테리아는 대식세포가 포함된 폐포(폐 내의 작은 기낭)의 내강에 도달합니다.
대식세포 패턴 인식 수용체는 박테리아의 병원체 관련 분자 패턴에 결합하여 포
작용으로 삼켜지도록 유도합니다. 삼키는 박테리아는 식세포막을 파열시키는 특수 단백질을 분비합니다. 박테리아는 세포질로 빠져나가 번식합니다.
감염 후 마우스를 마취하십시오. 리포터 효소 형광 또는 REF 이미징을 위해 박테리아 β-락타마제 효소의 리포터 기질을 복강 내 투여합니다.
기질은 순환을 통해 폐포에 도달하여 감염된 세포로 들어갑니다.
그것은 박테리아 외막을 관통하여 β-락타마제를 포함하는 주위 물질 공간에 도달합니다.
기판에는 형광 색소와 담금제를 연결하는 β-락탐 링이 포함되어 있습니다. 근접성으로 인해 형광색소의 형광은 소광제에 흡수됩니다.
β-락타마제는 β-락탐 고리를 가수분해하여 형광단을 방출하고 형광 방출을 초
래합니다.마이코박테리아 감염을 평가하기 위해 형광을 이미지화합니다.
계속하려면 알려진 체중의 동물을 전원이 켜진 접종 챔버에 넣으십시오. 챔버에는 최대 90마리의 마우스가 장착 될 수 있습니다. 그런 다음 도어의 모든 걸쇠를 닫습니다. 그런 다음 강철 클램프를 사용하여 분무기를 연결합니다. 그런 다음 챔버의 시작 버튼을 누르고 공기 흐름 속도를 분당 3-5리터로 설정합니다.
압축 공기는 평방 인치당 약 22-26파운드로 흐르며, 중요한 것은 챔버에서 접종물의 안개를 볼 수 있어야 한다는 것입니다. 15분 후 제어판 전면에 빨간색 표시등이 나타나고 신호음이 달리기 종료를 나타냅니다. 그런 다음 재설정 버튼을 눌러 타이머를 재설정합니다. 진공을 해제하려면 챔버 도어에 있는 작은 빨간색 버튼을 누르십시오.
그런 다음 챔버 문을 열고 쥐를 집 케이지로 돌려보냅니다. 앞으로는 동물들을 격리실에 가두세요. 그런 다음 운송 용기에 담긴 병을 생물 안전 캐비닛으로 되돌립니다. 거기에서 남은 박테리아 현탁액을 지정된 폐기물 용기에 버립니다. 그런 다음 사용한 분무기 용기를 생물학적 위험 백 안에 넣고 오토클레이브로 운반하기 위해 백을 밀봉합니다.
챔버를 청소하려면 내부 표면에 완충 페놀과 70% 에탄올을 뿌립니다. 이러한 용액이 해당 표면에 10분 동안 반응하도록 한 다음 완전히 닦아냅니다. 모든 물티슈는 생물학적 위험 쓰레기통에 버리십시오. 그런 다음 쓰레기, 폐기물 용기 및 사용한 분무기 용기를 오토클레이브합니다.
동물을 이미징실로 옮깁니다. 거기에서 텍스트 프로토콜에 따라 동물을 마취하고 복강내 주사로 조영제 기질을 주입합니다. 이미징 시스템 소프트웨어에서 시스템을 초기화하고 온도 막대가 녹색으로 바뀌면 계속 진행합니다. 시스템을 초기화한 후 마우스를 이미징 챔버에 놓습니다.
영상 촬영 중에 마취제를 받을 수 있도록 콧구멍이 코뿔 안에 있는지 확인하십시오. 이제 컴퓨터로 돌아갑니다. 획득 제어판에서 전체 동물 시각화를 위한 형광, 투과조명 또는 폐 조직을 보기 위한 에피 조명을 선택합니다. 단일 마우스의 경우 시야를 B로 설정하고 램프 레벨을 높음으로 설정합니다.
노출의 경우 자동 시간, 중간 비닝 및 F/Stop에 두세 개를 사용합니다. 그런 다음 여기 필터를 745나노미터로, 방출 필터를 780에서 840나노미터로 설정합니다. 그런 다음 시퀀스 설정으로 이동하여 관심 영역에서 9-12개의 투과조명 지점을 선택합니다. 이제 획득 버튼을 눌러 이미지를 수집합니다.