종양 특이적 항체의 In vivo 국소화를 평가하는 기법

인간 난소암 세포 현탁액을 섭취하십시오. 기저막 매트릭스 배지를 추가하고 겔 형성을 방지하기 위해 얼음 위에 보관합니다.

혼합물을 주사기에 넣고 무흉선 누드 마우스에 피하 주사합니다. 매트릭스가 겔화되면 바늘을 제거하여 혼합물이 배출되는 것을 방지합니다.

면역결핍 마우스에서 면역 반응이 없으면 주입된 세포의 생존력이 보존됩니다. 젤의 세포외 기질 단백질과 성장 인자는 성장 촉진 신호를 제공하여 종양 형성을 촉진합니다.

종양 세포는 표면 결합 엽산 수용체 알파-1 또는 FOLR1을 과발현합니다.

FOLR1 특이 항체를 복용하십시오. 형광 염료를 첨가하고 배양하여 항체와 염료 접합을 허용합니다.

마취된 종양 보유 마우스에 표지된 항체를 정맥 주사합니다.

항체는 순환을 통해 종양에 도달하고 종양 세포의 FOLR1에 결합하여 세포 표면을 형광으로 표지합니다.

생체 내 형광 이미징을 수행합니다. 여기되면 염료는 형광을 방출하여 종양의 항체 국소화 평가를 용이

1리터의 접합 완충액에 투석 카세트를 사용하여 0.5밀리리터의 항체를 투석합니다. 4시간 후, 투석 카세트를 새로운 완충액으로 옮기고 밤새 투석합니다. 접합 반응을 설정하려면 항체 1mg당 IRDye 800CW 0.03마이크로그램을 총 부피 500마이크로리터에 첨가합니다.

혼합물을 섭씨 20도에서 2시간 동안 배양합니다. 그런 다음 PBS에 대한 광범위한 투석을 통해 표지된 접합체를 정제합니다. 780나노미터에서 염료의 흡광도와 280나노미터에서 단백질의 흡광도를 측정하여 라벨링 정도를 추정합니다.

마우스 이종이식을 개발하려면 동물의 피부를 부드럽게 들어 올려 밑에 있는 근육층에서 분리합니다. 26게이지 바늘로 100마이크로리터의 세포 현탁액을 피부 아래에 천천히 주입합니다. 바늘을 빼내기 전에 몇 초 동안 기다리면 기저 매트릭스 배지가 피부 아래 세포와 함께 반고체 젤 모양의 구조를 형성하여 혼합물이 주사 부위에서 나오는 것을 방지할 수 있습니다.

생체 내 이미징을 수행하려면 꼬리 정맥을 통해 염료 표지 항체를 주입합니다. 마우스를 마취한 후 페달 반사에 대한 반응이 없는지 확인하고 따뜻한 물을 가하여 정맥을 확장합니다. 26게이지 바늘이 달린 1CC 인슐린 주사기를 사용하여 100마이크로리터의 부피로 표지된 항체 25마이크로그램을 주입합니다. 음성 대조군으로, 암세포를 표적으로 하지 않는 비특이적 IgG 이소형 항체를 표지하고 주입합니다.

항체 주사 후 8, 24, 48시간 후에 생체 내 이미징을 수행합니다. 이미징 소프트웨어에서 초기화를 클릭합니다. 스테이지 온도가 섭씨 37도인지 확인합니다. 제어판에서 이미징 마법사를 통해 형광 이미징을 설정하고 여기를 773 나노미터로, 방출을 792 나노미터로 설정합니다.

마취된 마우스를 이미징 챔버로 옮기고 노즈 콘을 사용하여 이미징 필드에 배치합니다. 준비가 되면 이미지 획득을 위한 제어판에서 획득을 클릭하고 자동 노출을 클릭합니다. 생성된 이미지는 사진 이미지에 형광을 오버레이한 것이며, 광학 형광 강도는 카운트 또는 광자 단위로 표시됩니다.