박테리아 세포 염색 및 면역학 연구를 위한 준비

JoVE Encyclopedia of Experiments

면역학

0 조회수 • 2:57 분 • July 8th, 2025

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일관된 결과를 위해 균일하고 활발하게 성장하는 박테리아를 지수 단계의 박테리아 배양물이 들어 있는 튜브로 시작하십시오.

원심분리하여 세포를 수집합니다. 파편이 포함된 상청액을 흡인하고 세포를 재현탁합니다.

세포 투과성 적색 형광 염료를 도입합니다. 염료 분자는 박테리아 세포막을 관통하여 핵양에 도달하여 DNA와 결합하고 박테리아에 적색 형광을 부여합니다.

원심분리하여 염색된 박테리아를 펠릿화하고 결합되지 않은 염료 함유 상청액을 흡인합니다.

박테리아를 성장 배지에 재현탁시켜 세포 생존력을 유지합니다.

광도계를 사용하여 600나노미터에서 희석된 박테리아 현탁액의 흡광도를 측정합니다.

흡광도 값을 표준 곡선과 비교하여 박테리아 농도를 결정합니다.

염색된 박테리아 현탁액의 원하는 부피를 성장 배지가 들어 있는 신선한 튜브로 옮깁니다. 이는 감염의 다양성 또는 MOI를 나타내는 숙주 세포 감염에 대해 원하는 박테리아 농도를 달성하기 위한 것입니다.

원하는 MOI로 염색된 박테리아는 면역학적 연구를 위한 준비가 되었습니다.

먼저, 실온에서 2분 동안 13,000배 g으로 원심분리하여 기하급수적으로 박테리아 배양물을 수확합니다. 세포 펠릿을 1밀리리터 PBS로 세척한 후, 박테리아 펠릿을 1밀리리터 PBS에 재현탁합니다.

600나노미터에서 광학 밀도를 측정하여 박테리아 현탁액의 농도를 결정합니다. 그런 다음 박테리아 현탁액을 염색하기 위해 500배 농축 원액 녹색 또는 빨간색 염색 염료 2마이크로리터를 1밀리리터의 박테리아 현탁액에 첨가하여 염료를 1배 희석합니다. 세포를 실온에서 30분 동안 배양하여 어둠 속에서 부드럽게 회전시킵니다.

30분 후, 염색된 박테리아를 13,000배 g에서 2분 동안 원심분리하고, 펠릿을 PBS 1밀리리터에 재현탁한다. 염색된 박테리아 세포를 13,000배 g에서 2분 동안 원심분리하여 수집합니다. 펠릿을 신선한 F-12K 배지 1밀리리터에 재현탁하고 각 배양물의 광학 밀도를 600나노미터에서 측정합니다. 그 후 감염의 다양성과 숙주 세포 농도에 따라 원하는 농도로 배양물을 순차적으로 희석합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026