Visualization of Bacteria in Bladder Biopsy Sections via Fluorescence In Situ Hybridization(형광 현장 혼성화를 통한 방광 생검 절편에서의 박테리아 시각화)

비로 병원성 박테리아가 포함된 탈라핀화 및 재수화된 감염된 방광 생검 조직 절편을 운반하는 유리 슬라이드로 시작합니다.

형광 표지 범용 프로브(박테리아 16s 리보솜 RNA 또는 16s-rRNA의 보존된 영역에 특이적인 상보적 단일 가닥 올리고뉴클레오티드)를 도입합니다.

최적의 혼성화를 위해 고온의 어둠 속에서 슬라이드를 배양합니다.

배양하는 동안 프로브는 박테리아 16s-rRNA의 보존된 영역에 독점적으로 혼성화되어 박테리아에 녹색 형광을 부여합니다.

혼성화 후, 결합되지 않은 프로브를 제거하기 위해 미리 예열된 완충액으로 세척합니다.

Hoechst 염료 및 형광단 표지 세포 단백질 마커로 조직 절편을 염색합니다.

Hoechst 분자는 DNA에 결합하여 핵을 파란색으로 염색하는 반면, 형광단 표지 마커는 뮤신 및 액틴 필라멘트와 같은 특정 세포 구성 요소와 상호 작용하여 생검 섹션에 적색 형광을 부여합니다.

슬라이드를 세척하고 조직 절편에 마운팅 미디어를 추가합니다.

공초점 현미경에서 적색 형광 운반 방광 생검 섹션 내의 녹색 형광은 조직 관련 박테리아를 확인합니다.

P1000 팁 상자의 저장소에 적셔서 구겨진 섬세한 작업용 물티슈와 멸균수를 추가하여 각 프로브에 대한 가습 챔버를 준비합니다. 슬라이드가 놓이는 곳이므로 팁 홀더 카트리지를 위에 놓습니다. 최종 세척이 완료되면 슬라이드 랙에서 슬라이드를 제거하고 티슈 면이 위로 향하도록 새 종이 타월 위에 놓습니다. 섬세한 작업용 물티슈를 사용하여 슬라이드를 건조시키고, 생검 부분 근처만 가볍게 두드려 물을 흡수하지 않도록 주의하십시오. 소수성 펜을 사용하여 생검 섹션 주위에 경계를 그리고 슬라이드 조직 면이 위로 향하도록 가습 챔버에 놓습니다.

그런 다음 가습실을 섭씨 50도로 설정된 인큐베이터에 넣습니다. 조직 주변의 소수성 경계에 의해 만들어진 직사각형이 채워지도록 조직 위에 50-150마이크로리터의 염색액을 직접 피펫팅하고 상자를 부드럽게 닫습니다. 어둠 속에서 섭씨 50도에서 밤새 배양합니다. 인큐베이터에 창문이 있는 경우 알루미늄 호일로 덮어 어두운 환경을 조성하십시오.

다음날 아침, 가습실에서 슬라이드를 제거하고 섬세한 작업용 물티슈로 남아 있는 혼성화 용액을 빠르게 흡수합니다. 그런 다음 슬라이드를 수직 염색 선반에 놓습니다. 염색 랙을 100ml의 예열된 세척 완충액이 들어 있는 알루미늄 호일로 감싼 코플린 용기에 10분 동안 넣습니다. 새 c