혈액에서 자성 유리 입자 매개 핵산 추출 기법

갓 채취한 인간 혈액이 들어 있는 튜브를 가져다가 용해 완충액을 첨가하십시오.

완충액의 세제는 세포막을 투과시켜 세포를 용해하고 세포내 핵산(NA)과 뉴클레아제를 방출합니다.

완충액의 카오트로픽 제제는 뉴클레아제를 변성시켜 NA 분해를 방지합니다.

자성 유리 입자 또는 MGP(실리카 코팅 자성 입자)를 추가하고 완전히 혼합합니다.

완충액의 낮은 pH는 실리카를 양성자화하여 MGP 표면에 양전하를 생성합니다.

음전하를 띤 NA는 전하를 띤 표면에 정전기적으로 결합하여 NA-MGP 복합체를 형성합니다.

자기장 아래에서 NA-MGP 복합체는 튜브 측면에 모입니다.

세포 파편과 단백질이 포함된 상청액을 버립니다.

NA-MGP 복합체를 세척 완충액에 재현탁하고, 자기장을 적용하여 복합체를 수집하고, 나머지 오염 물질과 함께 상청액을 폐기하여 여러 세척 단계를 수행합니다.

복합체를 용출 완충액에 재현탁합니다. 높은 pH는 NA-MGP 상호 작용을 방해하여 NA를 방출합니다. 용출된 NA는 다운스트림 분석을 위해 준비됩니다.

채취한 혈액에서 핵산을 정제하려면 진공관을 손으로 5-10회 뒤집어 튜브의 내용물을 다시 혼합합니다. 준비된 MGP의 분취량을 채혈 튜브에 직접 부은 다음 사용하지 않은 채혈 튜브의 새 뚜껑을 샘플이 들어 있는 튜브에 놓습니다. 뚜껑에 손가락을 대고 튜브가 단단히 닫혔는지 확인하고 튜브의 내용물을 5-10번 뒤집어 섞습니다.

튜브를 마그네틱 홀더에 놓고 뚜껑에 손가락을 대고 튜브가 단단히 닫혔는지 확인합니다. 그런 다음 튜브가 있는 마그네틱 홀더를 몇 번 뒤집어 MGP가 자석이 있는 튜브 측면에 모이기 전에 MGP를 분산시킵니다. 튜브의 뚜껑을 제거하고 일회용 피펫을 사용하여 튜브의 내용물을 50밀리리터 수집 튜브에 버립니다.

준비된 WB1 분취량을 채혈관에 직접 붓고 튜브의 뚜껑을 닫습니다. 내용물을 손으로 5-10회 섞습니다. 그런 다음 자석을 사용하여 튜브 측면의 구슬을 모으고 이전과 같이 액체를 제거합니다. 준비된 WB2 분취량에 비드를 재현탁합니다. 그런 다음 용액을 버리고 준비된 WB3 분취량으로 절차를 반복합니다.

마지막으로 마그네틱 홀더에서 튜브를 제거하고 준비된 EB 분취량을 채혈 튜브에 직접 붓습니다. 튜브에 뚜껑을 덮고 손가락으로 5-10번 두드려 MGP를 재현탁합니다. 마지막으로, 1.5밀리리터 일회용 피펫을 사용하여 재현탁된 MGP의 한 방울을 다운스트림 핵산 증폭 반응 혼합물로 옮깁니다.