유세포 분석을 위한 Natural Killer Cell-Mediated Cytotoxicity Assay 시료 전처리

0 조회수2:40 • July 8th, 2025

자연 살해 또는 NK 세포와 형광 염색된 표적 세포를 포함하는 세포 펠릿으로 시작합니다.

펠릿을 적절한 배지에 재현탁하고 배양합니다.

NK 세포는 표면 접착 단백질을 통해 상호 작용하여 표적 세포와 면역학적 시냅스를 형성합니다.

이것은 NK 세포 신호 전달을 시작하여 퍼포린과 그란자임을 포함하는 세포독성 과립을 시냅스로 방출합니다.

기공 형성 단백질인 퍼포린은 표적 세포의 막에 채널을 생성하여 그란자임이 세포질로 들어갈 수 있도록 합니다.

세린 프로테아제인 그란자임은 세포내 단백질과 상호 작용하여 표적 세포의 세포사멸 경로를 활성화합니다.

이제 요오드화 프로피듐 형광 염료를 첨가하십시오.

염료는 손상된 막을 통해 죽은 세포에 들어가 염기쌍 사이에 삽입하여 DNA에 결합합니다.

결과적으로, 죽은 세포는 이중 형광색소를 발현하는 반면 살아있는 세포는 단일 형광색소를 발현합니다.

샘플

은 죽은 표적 세포 및 살아있는 표적 세포 수를 정량화하여 NK 세포 유도 세포독성을 평가하기 위해 유세포 분석을 위한 준비가 되었습니다.

세포독성 분석 샘플을 준비하려면 먼저 각 샘플 및/또는 참가자에 대해 적절하게 1.5밀리리터 튜브를 라벨링하고 원하는 비율의 NK 세포 및 DiO 표지 K562 세포를 각 튜브에 피펫팅합니다.

원심분리로 세포를 수집하고 세포 펠릿을 방해하지 않고 상청액을 조심스럽게 제거합니다. 다음으로, 세포 혼합물을 500마이크로리터의 불완전한 NK 세포 배지에 재현탁시키고, 각 튜브의 세포를 5마이크로리터의 요오드화 프로피듐으로 표지합니다.

또 다른 원심분리를 통해 세포를 수집하고 저온 배양액을 섭씨 37도에서 2시간 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 동일한 원심분리 조건에서 세포를 원심분리하고 펠릿을 25마이크로리터의 신선하고 완전한 NK 세포 배양 배지에 재현탁합니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026