0 조회수 • 4:26 분 • July 8th, 2025
제된 인간 폐부터 시작하십시오.
실리콘 튜브를 폐의 주 기관지에 삽입합니다. 튜브를 고정하여 후속 단계에서 아가로스를 조직에 도입하는 경로를 제공합니다.
충전 중 아가로스 누출을 방지하기 위해 다른 기관지와 혈관을 고정하십시오.
완전히 팽창할 때까지 배지와 혼합된 미리 예열된 저겔화 아가로스를 폐에 도입합니다.
아가로스 중합을 위해 폐를 얼음 위에 놓고 조직에 안정성을 제공하고 절편 절차 중에 폐 구조를 유지하는 고체 겔 매트릭스를 형성합니다.
중합 후 폐 조직을 균일한 슬래브로 자릅니다. 조직 슬래브에서 원통형 조직 코어를 추출합니다.
냉각된 완충액으로 채워진 조직 슬라이서를 사용하여 조직 코어를 슬라이스하여 정밀하게 절단된 폐 슬라이스를 얻습니다.
슬라이스를 냉각된 배지가 들어 있는 배양 플레이트로 옮깁니다. 조직을 안정화시키기 위해 배양합니다.
마지막으로 슬라이스를 배지가 들어 있는 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 준비된 정밀 절단 폐 절편은 이제 실험 준비가 되었습니다.
이 절차를 시작하려면 실리콘 튜브를 삽입하고 튜브와 평행한 클램프로 고정하여 클램프가 조직을 꼬집지 않고 실리콘 튜브를 따라 함께 압착하도록 하여 기관을 캐뉼라합니다. 충전 절차 중에 아가로스가 누출되지 않도록 다른 모든 기관지, 혈관 및 부상을 클램프로 닫습니다.
주 기관지를 캐뉼라로 삽입하려면 좋은 해부학적 기술이 필요합니다. 폐를 너무 확장해서는 안 되며, 그렇지 않으면 조직이 산만해지고, 조직이 충분히 채워지지 않으면 조직이 너무 부드러워서 PCLS를 만들 수 없습니다.
그런 다음 비커에 등가량의 3% 저겔화 아가로스를 배양 배지와 혼합하고 50밀리리터 주사기를 사용하여 혼합물을 폐에 주입합니다. 주사기에 배지를 다시 채우기 전에 기포와 아가로스가 없는 플럭스를 피하기 위해 손가락이나 클램프로 카테터를 닫습니다. 폐 조직을 3-5cm 슬래브로 자릅니다.
티슈 슬라이서에 얼음처럼 차가운 EBSS 400밀리리터를 채웁니다. 즉시 코어링 도구가 있는 반자동 드라이버를 사용하여 폐 슬래브에서 원통형 조직 코어를 잘라냅니다. 그런 다음 조직 코어를 조직 슬라이서의 조직 홀더로 옮깁니다. 조직 코어 위에 무게를 놓고 조직 코어를 PCLS로 자르기 시작합니다. 배지는 유리 실린더의 클램프를 열어 티슈 슬라이서에서 비커로 배출해야 합니다.
다음으로, 조각을 비커에서 배양 배지가 있는 페트리 접시로 옮깁니다. 그런 다음 페트리 접시를 인큐베이터에 넣고 세척 단계 전에 배지를 예열시킵니다. 그런 다음 폐 조각을 웰당 2개의 슬라이스에 대해 최소 500마이크로리터의 배양 배지가 있는 24웰 배양 플레이트로 조심스럽게 옮깁니다.