$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
외부 자기장에 반응하는 상자성 가돌리늄 용액을 사용하십시오.
형광 표지된 Rhesus 또는 Rh 인자 양성 및 표지되지 않은 Rh 인자 음성 혈액 샘플을 도입합니다.
항-RhD 항체 코팅 저밀도 폴리머 비드와 코팅되지 않은 고밀도 비드를 추가합니다.
항-RhD 항체는 Rh 양성 적혈구의 RhD-항원에 결합하여 비드-적혈구 복합체를 형성합니다.
이제 샘플을 모세관에 넣고 밀봉합니다. 자기 부상 장치의 자석 사이에 튜브를 놓습니다.
같은 극을 향한 자석에 의해 생성된 자기장에서 상자성 용액은 샘플 구성 요소에 자기력과 부력을 가하여 밀도에 비례하는 높이에서 공중에 떠 있게 합니다.
저밀도 및 고밀도 비드는 각각 모세관의 상단과 하단에 공중에 떠 밀도 높이 기준을 설정합니다.
반자성인 혈액 세포는 자석 근처의 강한 자기장에 의해 반발되어 중간 위치에서 공중에 떠 있습니다.
비드-적혈구 복합체는 저밀도 비드와 적혈구 사이에 공중에 떠 있으며, 이 층의 형광 세포는 Rh 양성 적혈구의 존재를 확인합니다.
시작하려면 원클릭 란셋 장치를 사용하여 붉은털 인자 양성 헌혈자의 손가락을 찔러 DPBS 1밀리리터에 10마이크로리터의 혈액을 채취합니다. 붉은털 인자 양성 세포의 1밀리리터 현탁액에 1마이크로리터의 형광 염료를 첨가하여 원형질막을 형광 염색하고 섭씨 37도에서 15분 동안 배양합니다. 5,600 g에서 15초 동안 회전하여 세포를 펠릿화하고 1 밀리리터의 DPBS를 사용하여 펠릿을 세 번 세척합니다. 칼슘과 마그네슘이 포함된 HBSS 1밀리리터에 펠릿을 재현탁합니다. 원클릭 채혈 장치를 사용하여 붉은털 인자 음성 헌혈자의 손가락을 찔러 2마이크로리터의 혈액을 채취합니다.
비드만 포함된 실험 튜브를 준비하려면 칼슘과 마그네슘이 포함된 HBSS 174마이크로리터, IgG 대조 비드 1마이크로리터, 밀리리터당 밀도가 1.2g인 무거운 비드 1마이크로리터, 500밀리몰 가돌리늄 24마이크로리터를 추가합니다.
IgG를 함유한 실험 대조군 튜브를 준비하려면 칼슘 및 마그네슘이 포함된 HBSS 172마이크로리터, IgG 대조군 비드 1마이크로리터, 무거운 비드 1마이크로리터, 붉은털 인자 음성 혈액 1마이크로리터, 염색된 붉은털 인자 양성 혈액 현탁액 1마이크로리터, 500밀리몰 가돌리늄 24마이크로리터를 추가합니다.
샘플 실험 튜브를 준비하려면 칼슘 및 마그네슘이 포함된 HBSS 172마이크로리터, 항-RhD 코팅 비드 1마이크로리터, 무거운 비드 1마이크로리터, 붉은털 인자 음성 혈액 1마이크로리터, 염색된 붉은털 인자 양성 혈액 현탁액 1마이크로리터, 500밀리몰 가돌리늄 24마이크로리터를 추가합니다. 자기 부상 장치를 설정하고 튜브가 채워질 때까지 50마이크로리터의 샘플을 모세관에 넣습니다.
모
세관의 끝을 모세관 실란트로 밀봉하여 기포가 없는지 확인합니다. 모세관을 상단과 하단 자석 사이의 모세관 홀더에 놓습니다. 최적의 시청을 위해 스테이지와 초점을 조정하십시오. 세포와 비드가 자기 평형 위치에 안착할 때까지 약 5-20분 정도 기다립니다.