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면역학
0 조회수 • 2:40 분 • July 8th, 2025
미성숙 수지상 세포(DC)에 면역 조절 약리학적 제제를 추가하는 것부터 시작합니다.
DC는 면역 반응 중 T 세포 증식을 촉진하는 데 중요한 주요 조직적합성 복합체 또는 MHC 클래스 II 분자 및 공동 자극 분자를 발현합니다.
면역조절제는 DC와 결합하여 MHC 클래스-II 및 공동 자극 분자 발현의 하향 조절을 유발하여 DC를 내용성 수지상 세포 또는 TolDC로 전환합니다.
순진한 CD4+ T 세포와 TolDC를 공동 배양합니다.
공동 배양에 항원 펩타이드를 추가합니다.
TolDC는 펩타이드를 내재화한 후 생성된 항원을 처리하여 MHC 분자에 로드합니다.
항원 결합 MHC 분자는 세포막으로 전위됩니다.
나이브 CD4+ T 세포는 TolDC의 항원-MHC 복합체와 직접 상호 작용합니다.
성숙한 DC의 공동 자극 분자와의 상호 작용은 나이브 T 세포의 완전한 활성화를 가능하게 합니다.
공동 자극이 없으면 순진한 CD4+ T 세포는 휴면 상태를 유지하고 제시된 항원에 대한 면역 반응을 시작할 수 없습니다.
세포를 밀리리터당 2 x 105 수지상 세포 농도로 재현탁하고, 섭씨 37도에서 1시간 동안 적절한 실험 농도의 관심 트리테르페노이드로 처리한다.
배양의 마지막 3분의 1 동안 T 세포를 밀리리터당 1 x 10 7 세포 농도 및 1마이크로몰 CFSE로 섭씨 37도에서 15분 동안 재현탁합니다. 그런 다음 PBS로 세포를 세척하고 부피를 밀리리터당 2 x 106 T 세포의 최종 농도로 재조정합니다.
96웰 플레이트의 각 웰에서 처리된 수지상 세포 100마이크로리터를 CFSE 표지된 CD4 CD4 양성 T 세포 100마이크로리터와 공동 배양하고, OVA 펩타이드 322-329의 밀리리터당 100나노그램을 세포에 첨가하고, 배양 2일 내지 3일 후 유세포 분석법에 의해 T 세포의 CFSE 강도를 측정합니다.