0 조회수 • 2:49 분 • July 8th, 2025
적절한 기공 크기의 수직 재생 셀룰로오스 멤브레인이 포함된 대용량 원심 필터 장치를 사용하십시오.
완충액과 원심분리기를 추가합니다. 멤브레인 보습제를 포함하는 흐름을 제거합니다.
수용성 단백질과 세포외 소포를 포함하는 박테리아 배양 여과액 단백질(CFP) 또는 EV(박테리아에서 분비되는 생체 분자를 포함하는 나노 크기의 지질 결합 구조)를 장치에 로드합니다.
원심분리 중에 CFP는 원심력을 통해 막을 접선 방향으로 통과합니다.
막의 기공보다 작은 생체분자는 배양액과 함께 통과하는 반면, EV와 같은 큰 생체분자는 막 표면을 통과하여 막 막힘을 최소화합니다.
필터는 CFP를 최소 장치 부피로 농축시키며, 생체 분자 건조를 방지하기 위해 데드 스톱 부피의 도움을 받습니다.
완충액과 원심분리기를 추가합니다.
완충액은 잔류 배지 성분을 대체하여 CFP 생체 분자를 위한 등장 환경을 조성하고 무결성을 유지합니다.
농축액 컵을 필터 컵 위에 놓고 뒤집고 원심분리합니다. 추가 분석을 위해 농축된 CFP 잔류물을 회수합니다.
시작하려면 PBS의 전체 용량을 추가하여 100킬로달톤 분자량 차단 원심 필터를 준비합니다. 섭씨 4도에서 2,800배 g에서 5분 동안 원심분리합니다. 통과 흐름과 남은 PBS를 버리고 샘플 챔버를 Mtb CFP로 최대 용량까지 채웁니다. 부피가 한외여과 장치의 최소 부피로 감소할 때까지 섭씨 4도에서 2,800배 g으로 원심분리합니다. 전체 샘플이 충분히 감소될 때까지 필요에 따라 반복합니다.
총 장치 용량까지 농축액이 들어 있는 필터 장치에 1x PBS를 추가합니다. 앞에서 설명한 대로 부피를 줄이고 이 단계를 5회 반복하여 완전한 세척 및 완충액 교환을 보장합니다. 그런 다음 한외여과 장치 사양에 따라 100킬로달톤 농축 CFP 잔류물 또는 100R을 회수합니다. 최소 부피의 1x PBS로 필터를 최소 3회 세척하고 100R로 세척을 당겨 회수율을 극대화합니다.