Mycobacterial Extracellular Vesicles를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피 기술

다당류 수지 입자의 불활성 매트릭스로 채워진 크기 배제 크로마토그래피 컬럼을 사용합니다. 다공성 입자는 정의된 기공 크기를 가지고 있습니다.

최적의 정제를 위해 평형 완충액으로 컬럼을 세척합니다.

병원성 박테리아인 결핵균 배양액에서 처리된 농축 배양 여과액을 추가합니다. 여과액에는 세포외 소포(EV)와 박테리아가 분비하는 기타 가용성 단백질이 포함되어 있습니다.

EV는 크기가 다양하고 작은 구형 구조입니다. 그들은 지질 이중층에 둘러싸인 거대분자와 독성 인자를 포함합니다.

샘플은 중력 하에서 매트릭스로 들어갑니다. 컬럼을 통해 샘플이 이동할 수 있도록 버퍼를 추가합니다.

EV는 작은 기공 크기로 인해 수지에 들어갈 수 없으며 대신 입자 간 공간을 통해 이동하여 더 짧은 경로를 이동하고 먼저 용출됩니다.

크기가 작은 단백질은 모공으로 들어가 수지를 통해 더 긴 경로를 이동하고 마지막에 용리됩니다.

다운스트림 분석을 위해 EV를 포함하는 분획을 수집합니다.

크기 배제 크로마토그래피 또는 SEC 컬럼이 실온으로 평형을 이룰 수 있도록 합니다. 타워 유닛 뒷면의 전원 스위치를 사용하여 AFC를 켜고 필요한 경우 메인 메뉴 터치스크린에서 SETUP을 눌러 로드셀 설정을 조정합니다. SETUP 화면에서 CAROUSEL을 선택한 다음 CALIBRATE를 선택하여 캐러셀을 정렬합니다. 13개의 작은 구멍이 위를 향하도록 하는 캐러셀을 AFC 타워에 삽입하고 빼기 또는 더하기 버튼을 눌러 캐러셀을 조정하여 유체 노즐이 플러시 위치 바로 위에 오도록 합니다.

평형화된 SEC 컬럼에서 캡을 제거하고 SEC 컬럼을 적절한 컬럼 마운트에 밀어 넣습니다. AFC 타워에 조심스럽게 설치하십시오. 컬럼의 무선 주파수 식별 태그가 AFC를 향하고 컬럼과 밸브 사이의 연결이 안전한지 확인하십시오. 폐기물 배출구 튜브를 수거 용기에 넣습니다. SETUP 화면에서 수집 일정을 선택하고 빼기 또는 더하기 버튼을 눌러 개수를 13으로 설정하고 크기를 0.5밀리리터로 설정합니다.

버퍼 볼륨 설정을 기본값인 2.7밀리리터로 둔 다음 수집 일정 창을 닫습니다. 홈 화면에서 수집 시작을 선택하고 예를 선택하여 수집 매개 변수를 확인합니다. 뚜껑을 열고 회전목마 중심을 향하도록 라벨이 붙은 1.7밀리리터 미세 원심분리기 튜브 13개를 로드합니다. OK를 선택하여 AFC를 전진시킵니다. 그런 다음 컬럼 저장소를 장착하고 OK를 눌러 다시 전진합니다.

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