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면역학
0 조회수 • 6:34 분 • July 8th, 2025
화학적으로 사멸되고 형광 표지된 Bacillus anthracis의 현탁액을 섭취하십시오.
주로 폴리감마글루탐산으로 구성된 박테리아 캡슐은 식균 작용에 대한 보호 기능을 제공합니다.
보체 단백질을 파괴하기 위해 열비활성화된 인간이 아닌 영장류 혈청을 섭취하십시오. 박테리아 캡슐 기반 백신으로 면역된 동물로부터 분리된 이 혈청에는 항캡슐 항체가 포함되어 있습니다.
화학적으로 죽은 박테리아 현탁액을 혈청에 첨가합니다. 항체는 박테리아 캡슐에 특이적으로 결합하여 박테리아 옵소니제션을 촉진하고 식세포 세포에 의한 제거를 표시합니다. 옵소니제를 강화하기 위해 표준 보체 단백질을 첨가하십시오.
옵소화된 박테리아를 부착된 대식세포(식세포 세포)로 옮깁니다. 잠깐 인큐베이팅합니다.
박테리아의 항체와 보체 단백질은 각각 대식세포 Fc 수용체와 보체 수용체에 결합하여 박테리아 부착을 촉진합니다.
미디어를 제거합니다. 완충액으로 세척하여 부착되지 않은 박테리아를 제거합니다.
세포 무결성을 보존하기 위해 세포를 고정하십시오.
형광 염색제를 사용하여 대식세포를 표지합니다.
형광현미경을 사용하여 형광이 다른 대식세포에 부착된 형광균을 관찰하여 항캡슐 항체에 의한 효과적인 박테리아 옵소닝을 확인합니다.
고정제를 제거하기 위해 비활성화된 박테리아 스톡을 PBS에서 세 번 세척합니다. 밀리리터당 75마이크로그램의 최종 농도로 FITC 용액을 첨가합니다. 섭씨 4도에서 18-24시간 동안 천천히 혼합물을 교반합니다. 과잉 FITC를 제거하기 위해 이전과 같이 박테리아를 씻으십시오.
최종 세척 후, 동일한 시작 부피의 PBS에 간균을 재현탁합니다. 간균을 분취하여 사용할 때까지 섭씨 -20도에서 보관하십시오. 인간이 아닌 영장류의 소량의 테스트 혈청을 열 블록 또는 PCR 기계에서 섭씨 56도에서 30분 동안 열 비활성화합니다. FITC 표지 박테리아를 PBS로 2회 해동하고 세척하여 15,000배 g으로 3-5분 동안 펠릿화합니다. 동일한 시작 볼륨의 PBS에서 재일시 중단합니다.
96웰 둥근 바닥 플레이트에서 세포 배지에서 테스트 혈청을 연속적으로 희석합니다. 또 다른 96웰 둥근 바닥 플레이트에서 10마이크로리터의 희석된 테스트 혈청을 각 웰에 추가합니다. 그런 다음 새로 재구성된 아기 토끼 보충제 10마이크로리터를 추가합니다.
플레이트 번호 3에 20의 감염 다중도에 대해 적절한 부피의 FITC 표지 간균을 추가하여, 예를 들어, 50,
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