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면역학
0 조회수 • 2:55 분 • July 8th, 2025
흡수된 비강 점막 내벽액이 들어 있는 여과지를 얼음 위에서 해동하여 샘플 분해를 방지합니다.
체액은 케모카인과 사이토카인을 포함한 면역 매개체로 구성됩니다.
여과지를 완충액에 담그십시오. 내용물을 튜브 필터로 옮깁니다. 원심분리하여 여과지에서 점막 내벽액을 용출합니다.
여과된 비강 추출물을 매개체 특이적 포획 항체 배열로 패턴화된 분석 플레이트에 추가합니다.
면역 매개체는 해당 항체에 결합합니다.
각각의 매개체에 결합하는 루테늄 복합체로 표지된 검출 항체를 도입합니다.
트리프로필아민 또는 TPA를 함유한 트리스 기반 완충액을 첨가합니다.
전극에 전위가 가해지면 루테늄 복합체와 TPA가 산화됩니다.
생성된 TPA 라디칼은 루테늄 복합체를 여기시킵니다.
바닥 상태로 돌아가면 루테늄 복합체는 광자를 방출합니다.
측정된 광도는 점막 내막액의 특정 면역 매개체 농도에 비례합니다.
기도 면역 매개체 정량화를 위해 섭씨 영하 80도 보관에서 최대 10개의 샘플을 얼음 위에 놓고 식별 번호를 기록합니다. 샘플이 해동되면 피험자당 두 여과지를 여과지당 새로 준비된 완충액 150마이크로리터에 담급니다.
완충 원액 25밀리리터당 완전한 프로테아제 억제제 정제 1개를 보충하십시오. 샘플을 400RPM에서 5분 동안 플레이트 셰이커로 옮깁니다. 완충액과 여과지를 개별 셀룰로오스 아세테이트 튜브 필터의 컵에 옮깁니다.
샘플을 원심분리하여 미세 원심분리기 튜브 바닥에 여과된 비강 추출물을 수집합니다. 그런 다음 컵을 제거하고 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 다음으로, 비강 추출물의 150마이크로리터 분취량을 저단백질 결합 저장 플레이트의 개별 웰에 옮기고 분석할 때까지 플레이트를 섭씨 음하 80도에서 보관합니다. 그런 다음 표준 분석 프로토콜에 따라 고감도 전기화학발광 기반 다중화 어레이로 관심 있는 비강 면역 매개체의 농도를 측정합니다.