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면역학
0 조회수 • 6:56 분 • July 8th, 2025
열대열원충에 감염된 적혈구를 섭취하십시오. 기생충 시각화를 위해 기생충 DNA를 형광 염료로 라벨
링합니다.이러한 기생충에 감염된 적혈구를 말라리아에 노출된 개인의 혈청과 함께 배양합니다. 이 세포는 표면에 기생충 항원을 표시하며, 이는 혈청에서 자연적으로 획득된 인간 IgG 항체에 부착되어 식균 작용을 위해 세포를 옵소닝합니다.
옵소화된 기생충에 감염된 적혈구를 인간 유래 단핵구 또는 식세포 세포의 현탁액을 포함하는 단백질 코팅 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.
배양하는 동안 단핵구의 Fc-감마 수용체는 IgG 옵소화된 적혈구와 상호 작용하여 적혈구가 파고솜으로 삼켜지는 것을 유발합니다.
배양 후 플레이트를 원심분리하여 추가 세포 상호 작용을 방지하고 식균 작용을 중단합니다.
상청액을 버리십시오. 염화암모늄 용해 용액으로 처리하여 단핵구에 영향을 주지 않고 식균이 작용하지 않은 감염된 적혈구를 선택적으로 파열시킵니다.
용해 과정을 중지하기 위해 혈청 함유 완충액을 첨가하십시오. 용해된 적혈구를 포함하는 상청액을 원심분리하여 버립니다.
단핵구를 완충액에 재현탁합니다.
유세포 분석을 수행하여 기생충에 감염된 적혈구에서 형광을 나타내는 단핵구를 정량화하여 항체 매개 식균 작용을 확인합니다.
정제된 감염된 적혈구 현탁액을 에티듐 브로마이드를 함유한 기생충 배양 배지에서 밀리리터당 7번째 세포까지 3.3배 10씩 밀리리터당 2.5마이크로그램의 최종 농도로 조정한다. 다음으로, 플레이트를 폐기물 용기에 튕겨 하나의 96웰 플레이트에서 차단 용액을 제거합니다. 그런 다음 종이 타월 위에서 초과분을 제거하고 30마이크로리터의 에티듐 브로마이드 라벨 감염 적혈구 현탁액을 플레이트 상단 절반의 웰 1개를 제외한 모든 웰에 추가합니다. 빈 웰에 30마이크로리터의 기생충 배양 배지를 넣고 빛으로부터 보호된 실온에서 플레이트를 10분 동안 배양합니다.
배양이 끝나면 각 웰에 170마이크로리터의 기생충 배양 배지를 첨가하고 원심분리에 의해 플레이트 바닥에 감염된 적혈구를 침전시킵니다. 플레이트를 폐기물 용기에 튕겨 상청액을 제거하고 방금 시연한 것처럼 웰당 200마이크로리터의 기생충 배양 배지로 에티듐 브로마이드 표지된 감염된 적혈구를 두 번 더 세척합니다.
두 번째 세척 후, 다중 채널 피펫을 사용하여 펠릿을 방해하지 않고 각 웰에서 상청액의 전체 부피를 조심스럽게 제거하고 기생충 배양 배지에서 이전에 준비된 적절한 대조군 및 테스트 샘
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