JoVE 실험 백과사전
면역학
0 조회수 • 3:11 분 • July 8th, 2025
각 웰 바닥에 금 미세 전극이 있는 플레이트인 세포 배양 배지가 포함된 E-Plate로 시작합니다.
표적 암세포로 플레이트를 시드하고 금 미세 전극에 부착하여 전극 사이에 물리적 장벽을 형성합니다.
플레이트를 세포 분석기로 옮기고 전기 신호를 적용합니다.
부착된 셀은 전극 사이의 전자 흐름을 방해하여 임피던스로 측정되는 전자의 흐름을 방해합니다.
이러한 셀이 증식하고 전극에 부착됨에 따라 전기 임피던스는 부착된 셀 수에 비례하여 증가하여 실시간 측정이 가능합니다.
키메라 항원 수용체 T 세포 또는 키메라 항원 수용체를 발현하는 CAR T 세포를 도입합니다. 이 수용체는 암세포의 항원과 상호 작용하여 T 세포를 활성화하고 면역학적 시냅스를 형성합니다.
활성화된 CAR T 세포는 퍼포린과 그란자임을 포함한 세포독성 물질을 방출합니다.
퍼포린은 암세포막에 기공을 형성하여 그란자임이 세포에 들어가 세포용
해를 유도하는 것을 촉진합니다.이는 세포 박리를 촉진하고 전기 임피던스를 감소시키며 CAR T 세포의 세포 용해 가능성과 상관관계가 있습니다.
실시간 세포 용해 효능 분석의 경우 E-플레이트의 각 웰에 50-100마이크로리터의 표적 세포 배양 배지를 추가하고 세포 분석기 기기에서 배경 임피던스를 측정합니다.
트립신을 사용하여 배양 플레이트에서 표적 암세포를 분리합니다. 15밀리리터의 신선한 배양 배지로 세포를 세척하고 원심분리합니다. 계수를 위해 암세포 펠릿을 5밀리리터의 신선한 배지에 다시 현탁하고 세포 밀도를 적절한 표적 세포 농도로 조정합니다. 세포를 적절한 수의 웰에 추가하고 E-플레이트를 실온에서 30분 동안 방치하여 세포가 웰 바닥에 고르게 침전
되도록 합니다.평형 기간이 끝나면 플레이트를 실시간 세포 분석기에 넣고 밤새 15분마다 자동으로 임피던스 측정을 시작합니다. 표적 세포의 접착 및 증식을 실시간으로 추적할 수 있습니다.
다음날 아침, 이펙터 CAR 및 대조군 T 세포를 개별 튜브에서 적절한 농도로 희석하고 E-플레이트의 각 웰에서 50-100마이크로리터를 제거하여 각 웰의 최종 부피가 100마이크로리터가 되도록 합니다. 다음으로, 웰당 100마이크로리터의 배지에서 적절한 이펙터 대 표적 비율로 적절한 웰에서 이펙터 및 대조군 T 세포를 확인합니다. 그런 다음 플레이트를 세포 분석기 시스템으로 되돌리기 전에 실온에서 30분 동안 플레이트를 평형화합니다.
표적 암세포의 T 세포 매개 사멸의 효능을 측정
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