조혈낭에 대한 적세포 재부착을 평가하기 위한 Hemocyte Disturbance Assay

유리 구슬과 형광 표지 혈구(순환 및 상주 혈구로 구성된 곤충의 혈액 세포)를 발현하는 2령 초파리 유충이 들어 있는 튜브로 시작합니다.

상주 혈구는 혈액 세포 생성을 위한 틈새인 조혈 주머니에 부착됩니다.

기계적으로 유충을 교란하여 조혈낭에서 순환계로 상주 혈구를 방출합니다.

회복하는 동안 상주 혈구의 수용체는 조혈낭과 상호 작용하여 다시 부착됩니다.

회복 후 유충 한 마리를 특수 유리 슬라이드 웰에 넣고 앞쪽과 뒤쪽 끝의 복쪽 쪽을 절개하여 순환하는 혈구를 방출합니다.

남아 있는 순환 혈구를 제거하기 위해 세척하십시오. 동일한 유충을 새 우물로 옮기고 긁어서 상주 혈구를 제거합니다.

형광 현미경으로 방출된 순환 및 상주 혈구를 열거합니다.

교란 후 회복 시간이 증가함에 따라 회복 시작에 비해 순환 혈구의 감소와 상주 혈구의 증가는 조혈낭에 대한 재부착을 확인합니다.

상주 혈구를 기계적으로 교란하려면 최대 4-8마리의 유충을 선택하고 약 0.5g의 600미크론 유리 구슬과 0.5밀리리터의 물이 담긴 2밀리리터 미세 원심분리기 튜브에 넣습니다. 1분 동안 속도 10으로 손으로 튜브를 소용돌이치십시오.

미세 원심분리기 튜브의 내용물을 페트리 접시에 붓고 붓으로 유충을 골라서 유리 구슬에서 유충을 회수합니다. 회복 단계에서는 파리 먹이를 얇게 깔고 미리 준비한 페트리 접시에 유충을 넣습니다. 유충이 혈구 패턴을 다시 확립할 수 있도록 유충을 45분 동안 배양합니다. 회복 기간이 지나면 출혈-긁힘 해부를 계속하십시오.