단일 세포에서 단백질 분비물을 감지하기 위한 국소 표면 플라즈몬 공명 이미징

카르복실기를 포함하는 자체 조립 단층이 있는 기능화된 금 나노 구조 어레이를 특징으로 하는 유리 센서 칩으로 시작합니다.

미세유체 어셈블리 내에 칩을 고정하고 링커를 도입하여 카르복실기를 활성화합니다.

펩타이드 리간드를 추가하여 링커를 통해 활성화된 카르복실기와 접합합니다.

비활성화제 화합물 함유 완충액으로 처리하고 비특이적 결합 부위를 비활성화하고 완충액으로 세척합니다.

편광을 칩에 집중시킵니다. 국부적인 표면 플라즈몬 공명 이미징 시스템을 사용하여 어두운 배경에 밝은 사각형으로 나타나는 어레이의 이미지를 얻습니다.

공명각에서 금 전자는 빛을 흡수합니다. 해당 각도에서 반사된 빛의 강도를 측정하여 센서 응답을 생성합니다.

칩에 결합하고 세척하는 단백질 분비 하이브리도마 세포를 도입합니다.

부착된 세포는 근처 어레이의 리간드와 상호 작용하는 단백질을 분비합니다.

이러한 상호 작용은 반사된 빛의 각도와 강도를 변경하여 센서 반응의 변화를 일으켜 세포의 분비 활동을 확인합니다.

국부적인 표면 플라즈몬 공명 또는 LSPR 칩을 세척하고 재생하기 위해 5% 수소와 95% 아르곤의 300밀리리터 혼합물에서 45초 동안 40와트의 전력으로 플라즈마 재를 방출합니다. SPO와 SPC의 3:1 비율로 구성된 2성분 에탄올 티올 용액에 칩을 담그어 플라즈마 회분 직후 금 표면과 나노 구조를 기능화합니다. 칩을 티올 용액에 밤새 방치하여 자체 조립된 단층을 형성한 후 에탄올로 헹구고 질소 가스로 건조시킵니다.

알루미늄

바닥 조각에 칩을 놓아 맞춤형 미세유체 홀더 내에 LSPR 칩을 로드합니다. 그런 다음 이 하단 조각과 실리콘 개스킷 사이에 칩을 끼우고 4개의 나사를 사용하여 투명한 플라스틱 상단 조각을 끼워 어셈블리를 고정합니다.

일반적인 SPC 기반 티올 적용의 경우 탈이온화 증류수에 133밀리몰 EDC와 33밀리몰 NHS의 1:1 혼합물 300마이크로리터를 드롭 코팅하여 SPC 티올 성분의 카르복실기를 활성화합니다. 10분 동안 기다린 후 10밀리몰 PBS로 표면을 수동으로 헹굽니다.

그런 다음 300마이크로리터의 리간드 용액을 드롭 코팅하여 활성화된 카르복실기를 관심 리간드와 접합시킵니다. 1시간 동안 기다린 후 10밀리몰 PBS로 표면을 헹구고 칩의 PBS에 300마이크로리터의 0.1몰 에탄올아민을 드롭 코팅하여 비특이적 결합을 최소화합니다. 10분 동안 기다린 후 0.005% 트윈 20 또는 PBS-T20을 함유한 P