0 조회수 • 2:49 분 • July 8th, 2025
항균 펩타이드인 박테리오신을 생성하는 유산균(LAB)으로 구성된 마우스 대변 현탁액을 취하여 예열된 LAB 선택적 연질 한천 배지에 접종합니다.
배지를 한천 판에 부어 첫 번째 층을 형성합니다.
두 번째 한천 층을 겹쳐서 배양합니다.
첫 번째 층은 LAB 성장을 선택적으로 촉진하여 분비된 박테리오신 분자가 콜로니에서 주변 배지로 바깥쪽으로 확산되도록 합니다.
두 번째 층에는 박테리오신의 확산을 허용하고 표면에서 LAB 콜로니의 성장을 방지하는 무세포 배지가 포함되어 있습니다.
이제 박테리오신 민감성 균주를 포함하는 세 번째 한천 층을 붓습니다.
세 번째 층에서 자라는 박테리아는 하층에서 확산되는 박테리오신을 만납니다.
박테리오신은 민감한 박테리아의 세포막을 파괴하여 세포 항상성을 방해하고 세포 사멸을 초래하며 세 번째 층에서 명확한 영역으로 보입니다.
박테리오신 효능을 평가하기 위해 영역 직경을 측정합니다.
대변 샘플에서 박테리오신 생성 박테리아 세포를 계산하려면 박테리오신 생산자의 희석된 세포를 예열된 MRS 연질 한천 4밀리리터로 옮깁니다. 한천을 와일로 혼합하고 세포를 MRS 1.5% 한천 플레이트에 붓습니다. 이 계층을 첫 번째 계층이라고 합니다.
또다른 4밀리리터의 무세포 0.8% MRS 연질 한천을 첫 번째 층에 옮겨 연질 한천 내에 모든 세포를 내장합니다. 이 층은 세포가 한천 플레이트 표면에서 콜로니로 자라는 것을 방지하기 위한 것입니다.
멸균 후드에서 세포 성장 및 콜로니 형성을 위해 플레이트를 섭씨 30도에서 20-24시간 동안 배양하기 전에 5-10분 동안 뚜껑을 열어 플레이트를 건조시킵니다.
박테리오신 생성 콜로니를 식별하기 위해 각 플레이트에 대해 적절한 지표 균주의 하룻밤 배양액 40마이크로리터를 예열된 연질 한천 4밀리리터와 혼합합니다. 혼합물을 접시에 붓습니다. 이 계층을 세 번째 계층이라고 합니다.
세포 성장 및 콜로니 형성을 위해 이전과 같이 플레이트를 건조하고 배양합니다. 박테리오신 생산 콜로니는 콜로니 주변에 명확한 억제 영역이 있습니다.