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면역학
0 조회수 • 6:41 분 • July 8th, 2025
박테리아 생물막으로 코팅된 원통형 지지대 또는 못이 있는 뚜껑이 있는 마이크로타이터 플레이트를 가져 가십시오.
생물막 부착 측정에 초점을 맞추고 느슨하게 부착되거나 플랑크톤 박테리아를 제거하기 위해 버퍼가 있는 마이크로타이터 플레이트 웰에 생물막으로 코팅된 페그 뚜껑을 놓습니다.
헹군 생물막 코팅 페그 뚜껑을 테스트 항균제 농도를 증가시키는 챌린지 플레이트로 옮깁니다. 흔들지 않고 배양하십시오.
약제의 농도와 항균 잠재력에 따라 박테리아 대사 활동과 생물막 무결성을 방해합니다.
배양 후, 플랑크톤 박테리아를 제거하기 위해 완충액 함유 플레이트 웰에 페그 뚜껑을 놓습니다.
세포 투과성의 약한 형광 염료인 레사주린을 포함하는 생물막 회수 배지를 사용하여 마이크로타이터 플레이트 웰로 옮깁니다. 인큐베이트.
대사 활성 박테리아에서 탈수소효소 효소는 파란색 레사주린을 분홍색 형광 레소루핀으로 환원시킵니다.
레사주린 전환의 부족은 생물막 박멸을 나타내는 반면, 레소루핀으로의 전환은 생존 가능한 세포의 존재를 나타냅니다.
레사주린 전환을 생성하지 않는 가장 낮은 테스트 항균제 농도는 최소 생물막 박멸 농도를 나타냅니다.
신선한 96웰 플레이트를 가져다가 실온으로 평형화된 CRPMI 100마이크로리터를 B에서 H행 사이의 각 웰에 추가합니다. 최대 4개의 테스트 화합물을 CRPMI 1.0밀리리터에 개별적으로 희석하여 원하는 최종 농도의 2배로 희석합니다. A1 내지 A3 웰에 200 마이크로리터의 화합물 1, A4 내지 A6 웰에 200 마이크로리터의 화합물 2, A7 내지 A9에 화합물 3 200 마이크로리터, A10 내지 A12에 화합물 4 200 마이크로리터를 추가합니다.
다중 채널 피펫을 사용하여 테스트 화합물을 연속적으로 희석합니다. 먼저 100마이크로리터를 A열에서 B열로 옮기고 혼합합니다. 그런 식으로 100마이크로리터를 우물로 계속 옮깁니다. 각 전송 후 혼합하고 F 행에서 중지합니다. 혼합 후 F행에서 100마이크로리터를 쓰레기통으로 배출합니다. G열과 H열에 액체를 옮기지 마십시오. 마지막으로 다중 채널 피펫을 사용하여 플레이트의 각 웰에 100마이크로리터의 CRPMI를 추가하여 최종 부피를 200마이크로리터로 만듭니다.
200마이크로리터의 인산염 완충 식염수를 생물막 개시 플레이트와 동일한 치수의 웰을 특징으로 하는 신선한 멸균 96웰 플레이트에 추가합니다. 다음으로, 배양된 생물막 개시 플레이트에서 비닐
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