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면역학
0 조회수 • 4:00 분 • July 8th, 2025
림프구 및 대식세포를 포함한 침윤된 면역 세포가 있는 포르말린 고정, 탈라핀화 및 재수화된 측두 동맥 생검 절편이 포함된 슬라이드로 시작합니다.
활성화된 대식세포는 엽산 수용체 베타 또는 FR-β를 발현합니다 — 대식세포를 다른 면역 세포와 구별하는 질병 관련 마커입니다.
슬라이드를 예열된 완충액으로 옮겨 표면 수용체를 회수합니다.
절편을 과산화수소로 처리하여 세포내 과산화효소 활성을 차단합니다.
이러한 단백질을 발현하는 면역 세포에 결합하는 CD3, CD68 및 FR-β를 표적으로 하는 1차 항체의 혼합물을 도입합니다.
비오틴화된 2차 항체를 첨가하여 1차 항체와 상호 작용하고 세척합니다.
비오틴과 결합하는 스트렙타비딘 접합 효소와 오버레이합니다.
효소와 상호 작용하여 국부적인 갈색 침전물을 생성하는 발색 기질로 처리합니다.
대조염색인 헤마트톡실린을 도입하여 핵을 파란색으로 염색합니다.
작고 둥근 갈색 염색 세포를 CD3 발현 림프구로, 크고 불규칙한 갈색 염색 세포를 CD68 및 FR-β 발현 대식세포로 현미경으로 식별합니다.
섹션에서 대식세포를 정량화하여 전체 침윤된 면역 세포 간의 비율을 찾습니다.
항원 검색을 위해 랙을 섭씨 95도의 200마이크로리터, 리터당 10밀리몰, 구연산염 완충액이 들어 있는 유리 용기에 30분 동안 옮깁니다. 배양이 끝나면 슬라이드를 실온으로 20분 동안 식힌 후 흐르는 물로 5분 동안 헹굽니다.
내인성 과산화효소 활성을 제거하려면 먼저 소수성 마커를 사용하여 각 조직 샘플 주위에 원을 그린 다음 샘플을 200마이크로리터의 3% 과산화수소에 10분 동안 배양한 다음 200마이크로리터의 트리스 완충 식염수 또는 세척당 TBSS에서 3회 세척합니다. 마지막 세척 후, 각 슬라이드를 부드럽게 두드려 여분의 완충액을 제거하고, 200마이크로리터의 관심 있는 1차 항체 칵테일과 커버슬립을 각 슬라이드에 첨가하여 실온의 습한 챔버에서 1시간 동안 배양합니다.
배양이 끝나면 커버슬립을 버리고 신선한 TBSS에서 2분 동안 세 번 세척하여 슬라이드를 헹굽니다. 여분의 완충액을 제거한 후, 200마이크로리터의 적절한 비오티닐화 2차 항체 용액과 커버슬립을 각 슬라이드에 첨가하여 실온의 습한 챔버에서 45분 동안 배양합니다. 커버슬립을 폐기한 후 그림과 같이 TBSS로 슬라이드를 헹굽니다. 초과 버퍼를 제거합니다.
실온에서 10분 동안 200마이크로리터의 DAB 기질 완충액으로 절편을 활성화합
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