DNA 기반 장력 프로브를 사용하여 면역 세포가 가하는 수용체 힘 평가

폴리에틸렌 글리콜 고정 금 나노입자가 있는 기능성 유리 커버슬립으로 시작하십시오.

반대쪽 팔에 두 개의 올리고뉴클레오티드와 혼성화된 DNA 헤어핀을 포함하는 DNA 헤어핀 장력 프로브를 추가합니다.

리간드 가닥에는 형광단과 비오틴이 포함되고, 앵커 가닥에는 소멸제와 티올 그룹이 포함되어 있습니다. 이 설정에서 소광제는 형광을 억제합니다.

DNA 프로브는 금 나노입자에 결합하여 유리 커버슬립에 고정됩니다.

리간드 가닥의 비오틴 분자와 상호 작용하는 스트렙타비딘을 도입합니다.

사전 결합된 스트렙타비딘 분자에 결합하는 비오티닐화 리간드를 추가합니다.

커버슬립에 CD8 양성 T 세포를 오버레이합니다. 이들의 수용체는 고정된 리간드와 상호 작용하여 수용체-리간드 상호 작용 부위를 형성합니다.

이러한 상호 작용은 DNA 헤어핀 구조를 펼치는 힘을 생성하여 형광단을 소광제에서 분리하고 형광 방출을 촉진합니다.

형광 신호를 보존하기 위해 프로브의 펼쳐진 세그먼트와 상호 작용하는 비형광 잠금 가닥을 도입합니다.

면역 세포에 의해 가해지는 수용체력을 평가하기 위해 형광을 정량화합니다.

시작하려면 50밀리리터 비커에 폴리테트라플루오로에틸렌 랙에 25mm 커버슬립을 놓고 커버슬립을 물에 담가 세 번 헹굽니다. 같은 양의 에탄올과 물을 혼합하고 랙과 커버슬립이 들어 있는 비커에 이 용액 40밀리리터를 추가합니다. 그런 다음 파라필름 테이프를 사용하여 비커를 밀봉합니다.

초음파 세척기에서 비커를 15 분 동안 초음파 처리하여 커버 슬립을 청소하고 초음파 처리 후 액체를 버립니다. 그런 다음 랙과 커버슬립이 들어 있는 비커를 물로 최소 6회 헹구어 남아 있는 유기 용매를 제거합니다. 신선한 피라냐 용액을 준비하려면 50밀리리터 비커에 황산 30밀리리터를 넣고 과산화수소 10밀리리터를 천천히 첨가합니다. 유리 피펫 끝을 사용하여 피라냐 용액을 부드럽게 혼합합니다.

에칭을 시작하려면 커버슬립을 고정하는 랙을 피라냐 용액이 들어 있는 비커로 옮기고 실온에서 30분 동안 배양하여 커버슬립을 세척하고 수산화합니다. 그런 다음 강철 또는 폴리테트라플루오로에틸렌 핀셋을 사용하여 랙을 깨끗한 50밀리리터 비커로 옮기고 물로 6번 헹굽니다. 물을 완전히 제거하려면 커버슬립을 고정하는 랙을 40밀리리터의 에탄올이 담긴 50밀리리터 비커에 담근 다음 에탄올을 버립니다.

다음으로, 랙을 실온에서 1시간 동안 3% 아미노프로필 트리에톡시 실란을 함유한 에탄올