1차 인간 면역 세포의 항진균 활성에 대한 실시간 평가

인간 호중구 또는 면역 세포의 현탁액이 포함된 유리 기반 이미징 접시로 시작하여 형광 이미징 시스템에서 시각화합니다.

유전자 변형 형광 Aspergillus 리포터 분생자 또는 곰팡이 포자를 도입하고 최대 6시간 동안 일정한 간격으로 이미지를 캡처합니다.

곰팡이 포자는 적색 형광 단백질을 발현하고 분해되지 않는 자홍색 형광단으로 외부적으로 표지되어 죽은 세포와 살아있는 세포를 구별하는 데 도움이 됩니다.

배양하는 동안 호중구는 패턴 인식 수용체를 통해 분생자의 병원체 관련 분자와 상호 작용하여 식체 내에서 삼키는 것을 촉진합니다.

나중에 식체는 효소 함유 리소좀과 융합하여 식체리소좀을 형성합니다.

식식체 내부에서 활성 산소종과 효소는 분생포자를 분해합니다.

살아있는 세포 이미징 동안 초기 시점에서 호중구의 식체 내에서 강렬한 빨간색 및 자홍색 형광은 살아있는 분생자의 존재를 나타냅니다.

시간이 지남에 따라 자홍색 형광이 유지되고 적색 형광이 감소하면 분생자가 분해되어 호중구의 항진균 활성이 확인됩니다.

현미경 검사 중에 DsRed 및 AlexaFlour 633을 시각화하려면 현미경 히터를 예열하고 현미경과 컴퓨터를 켭니다. 다음으로, 100마이크로리터를 3x10을 6밀리리터당 FLARE 분생자 현탁액을 이미징 접시의 적절한 웰에 첨가합니다. FLARE 분생자가 추가된 시간을 기록합니다.

이미징 접시를 현미경 스테이지에 장착합니다. 그런 다음 획득 설정에서 레이저 출력을 10%로, 노출 시간을 1초로 설정하고 DsRed 및 AF 633의 선명하지만 과다 노출되지 않은 이미지를 위해 카메라 감도를 조정하고 스테이지 포인트 목록을 설정합니다. 모든 포인트에 초점이 맞춰지고, 형광 채널이 최적화되고, 주기 시간과 지속 시간이 설정되면 이미징을 초기화합니다.