0 조회수 • 3:37 분 • July 8th, 2025
영양 함유 한천 플레이트로 시작하여 억제제 생성 1차 박테리아의 하룻밤 배양액을 중앙에 한 방울 떨어뜨립니다.
배양액을 건조시켜 박테리아의 확산을 최소화하고 배양합니다.
개별 박테리아는 뚜렷한 콜로니를 형성하고 한천을 통해 일정 거리까지 확산되는 억제제 분자인 항균 화합물을 분비합니다.
경쟁사 박테리아 균주의 희석된 배양액을 1차 박테리아 콜로니가 포함된 한천 표면에 고르게 분사합니다.
배양하는 동안 항균 화합물은 경쟁 박테리아와 상호 작용하여 필수 세포 과정을 방해합니다.
이로 인해 특정 영역에서 경쟁 박테리아가 사멸하여 박테리아 성장이 크게 감소합니다.
항균 화합물이 없는 지역에서는 경쟁 박테리아가 영양분을 이용하고 뚜렷한 콜로니를 형성합니다.
이것은 뚜렷한 억제 영역을 가진 차등 성장 패턴을 만듭니다. 박테리아 유래 항균 화합물의 효과를 평가하기 위해 이 영역의 직경과 영역 선명도를 결정합니다.
박테리아 하룻밤 배양을 준비하려면 경쟁자 및 억제제 균주를 멸균 BHI 한천 플레이트에 줄무늬로 만들고 섭씨 37도에서 약 18시간 동안 호기적으로 배양합니다. 28밀리리터 범용 병에 멸균 BHI 국물 10밀리리터에 필요한 경쟁 박테리아 균주의 단일 콜로니를 접종합니다.
배양액을 섭씨 37도 및 250RPM의 범용 궤도 셰이커에서 밤새 배양합니다. 다음날 접종이 접시에 퍼지는 것을 방지하기 위해 한천 플레이트가 뚜껑에 결로가 생기지 않고 완전히 건조되었는지 확인하십시오. 한천 플레이트 중앙에 25마이크로리터의 하룻밤 배양액을 피펫팅하고, 피펫 플런저를 완전히 누르지 않도록 하여 배양액을 한천 전체에 분사하는 기포를 방지합니다.
배양액의 확산을 제한하기 위해 배양액을 실온에서 건조시키십시오. 그런 다음 한천 플레이트를 섭씨 37도에서 호기성 하룻밤 동안 배양합니다. 흡수지로 깐 레벨 2 안전 캐비닛 아래에서 작업하면서 하룻밤 배양액을 성장시킨 후, BHI 국물을 사용하여 배양액을 10배 희석하여 밀리리터당 약 4배 10에서 6번째 CFU를 산출합니다. 그런 다음 희석된 배양액을 멸균 플라스틱 향수 기화기 병에 붓습니다.
지연된 성장 억제 분석을 수행하려면 각 기화기 병을 통해 배양물을 분사하여 한천에 분사하기 전에 배양물이 스프레이 메커니즘에 로드되도록 합니다. 한천 위 약 15cm 거리에서 약 250마이크로리터의 희석된 배양액을 한천 표면 전체에 분사합니다. 플레이트를 섭씨 37도에서 밤새 호기적으로 배양합니다.
지연된 성장 억제를 해석하려면 분무된 경쟁 균주의 성장 억제 영역을 밀리미터 단위로 측정하고 억제제 생산자의 중심 지점의 직경을 뺍니다. 마지막으로 텍스트 프로토콜에 따라 억제 영역에 대한 선명도 점수를 기록합니다.