항생제 투여 시 세균 생존율을 결정하기 위한 ATP 활용 분석

박테리아 배양액을 분석 플레이트에 파종하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 플레이트를 배양합니다.

박테리아 세포에는 표면 부착물과 필리가 있어 서로 달라붙어 작은 응집체를 형성할 수 있습니다.

다양한 항생제 농도를 웰에 추가하고 대조군을 위해 치료하지 않은 상태로 둡니다.

항생제 분자는 민감한 박테리아와 상호 작용하여 성장 및 번식 능력에 영향을 미쳐 사망에 이르게 합니다.

항생제 내성 박테리아는 대사 활동을 유지하여 ATP 분자를 생성합니다.

초음파 처리기를 사용하여 박테리아 세포를 파괴하여 ATP를 포함한 세포 내 내용물을 방출합니다.

루시페린, 루시페라아제 효소 및 기타 보조 인자를 포함하는 ATP 활용 글로우 시약을 추가합니다.

루시페라제는 ATP와 산소를 활용하여 루시페린을 여기된 옥시루시페린으로 전환합니다.

옥

시루시페린은 이후 바닥 상태로 전환되어 발광을 방출합니다.

플레이트 리더를 사용하여 흡광도를 측정합니다.

항생제 농도가 높을 때 흡광도가 감소하면 ATP 생산이 낮아져 박테리아 생존율이 감소했음을 나타냅니다.

650나노미터 또는 OD₆₅₀에서 광학 밀도를 측정하여 부유 박테리아의 농도를 결정하고 GC 농도를 밀리리터당^약 1 x 10 8 콜로니 형성 단위로 조정합니다. 다음으로, 99웰 플레이트의 개별 웰에 96마이크로리터의 GC 현탁액을 추가하고 박테리아가 섭씨 37도와 이산화탄소 5%에서 6시간 동안 응집되도록 합니다.

배양이 끝나면 연속적으로 희석된 세프트리악손 1마이크로리터를 각 웰에 추가하고 일부 웰은 대조군 역할을 위해 처리되지 않은 상태로 두고 플레이트를 인큐베이터에 다시 24시간 동안 돌립니다. 다음날, 초음파 처리당 5초 동안 144와트 및 20킬로헤르츠에서 각 웰의 현탁액을 3회 초음파 처리하고 각 웰에 100마이크로리터의 상업적으로 이용 가능한 ATP 활용 글로우 시약을 추가합니다.

각 웰에서 150마이크로리터의 혼합물을 새로운 96웰 블랙 마이크로플레이트의 개별 웰로 조심스럽게 옮기고 플레이트 리더에서 560나노미터에서 각 웰의 흡광도를 측정합니다. 그런 다음 일련의 항생제 치료 후 얻은 판독값과 처리되지 않은 우물의 판독값의 비율로 생존율을 계산합니다.