세포독성 T 림프구 반응에서 면역우성을 평가하기 위한 분석

다양한 면역원성을 갖는 비반응성 펩타이드 에피토프 또는 종양 항원 유래 펩타이드 에피토프를 나타내는 형광 염료 표지 표적 세포로 시작합니다.

이 세포는 각각 비반응성, 하위 우성 및 면역우성 펩티드 에피토프의 제시에 해당하는 다양한 형광 강도(낮음, 중간 및 높음)를 나타냅니다.

감작된 마우스에게 세포 현탁액을 정맥 주사합니다.

주입된 세포는 세포독성 T 림프구 또는 CTL을 포함한 면역 세포 집단을 포함하는 비장으로 이동합니다.

비장 내에서 CTL은 표적 세포의 에피토프와 상호 작용합니다.

면역

원성이 더 강한 면역우성 에피토프는 강력한 CTL 면역 반응을 유발하여 세포독성 물질을 방출하고 고강도 형광 세포 용해를 초래합니다.

쥐 비장을 모아 기계적으로 방해하십시오. 용해 완충액을 첨가하여 적혈구를 제거하고 현탁액을 여과합니다.

세포 펠릿을 원심분리하고 재현탁합니다.

형광 활성화 세포 분류기를 사용하여 세포를 분류합니다. 중간 및 저강도 형광 세포에 비해 고강도 형광 세포의 감소는 세포독성 T 림프구 반응에서 면역우세를 확인합니다.

표적 세포를 주입하기 위해 먼저 소스 튜브를 부드럽게 소용돌이치고 3개의 CFSE 표지 세포 현탁액을 동일한 비율로 새 튜브에 모았습니다. 튜브 내용물을 멸균 PBS로 채우고 원심분리하여 세포를 수집하여 계수합니다. 그런 다음, 부피를 수용자 농도당 PBS 200마이크로리터당 1 x 10⁷ 혼합 표적 세포로 조정하고, 각 수용자 C57-Black-6 마우스의 꼬리 정맥에 200마이크로리터 부피의 세포 현탁액을 주입한다.

주사 후 2-4시간 후, 시연된 대로 각 수혜 동물의 비장을 제거하고 처리하고, 분리된 백혈구를 비장당 3밀리리터의 PBS에 재현탁합니다. 처리된 각 비장에서 7번째 세포에 약 10배 10을 깨끗한 FACS 튜브로 옮기고, CFSE 저, 중간 및 고표적 세포 집단을 게이트하는 데 입증된 대로 유세포 분석기에서 세포를 즉시 실행합니다.

그런 다음 형광 1 채널에서 총 2,000개의 CFSE 저 이벤트를 획득하고 텍스트에 자세히 설명된 공식에 따라 각 동족 표적 세포 집단의 특정 용해를 계산합니다.