therapy-induced senescent cancer cells의 유세포 분석 기반 정량화

0 조회수4:19 • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

일정 비율의 세포에서 노화를 유도하는 화학 요법 약물로 전처리된 암세포를 섭취하십시오.

이 세포는 알려진 노화 마커인 자가형광 리포푸신 과립을 축적합니다.

세포에 들어가 리소좀 양성자 펌프를 억제하여 리소좀 산성화를 방지하는 항생제를 추가합니다.

pH가 증가하면 리소좀 효소가 비활성화됩니다.

노화 세포는 중성에 가까운 pH에서도 리소좀 β-갈락토시다아제를 과발현하여 노화 바이오마커가 됩니다.

β-갈락토시다제 기질을 도입합니다. 인큐베이트.

β-갈락토시다아제는 내재화된 기질을 형광 생성물로 가수분해하여 노화 세포를 표지합니다.

원심분리하여 상청액을 버립니다.

세포 생존율 염료를 추가합니다. 살아있는 세포 내에서 활성 에스테라아제는 염료를 막 불투과성 형광 제품으로 전환합니다. 막 무결성이 손상된 죽은 세포는 염색되지 않은 상태로 남아 있습니다.

유세포 분석을 사용하여 이중 마커인 리포푸신과 형광 β-갈락토시다제 기질을 나타내는 생존 세포를 검출하여 노화 세포를 나타냅니다.

약물 효능을 입증하기 위해 노화 세포의 비율을 정량화합니다.

먼저, DMEM에 1마이크로몰 바필로마이신 A의 용액을 1밀리리터당 6번째 세포에 1배 10의 농도로 세포 펠릿에 첨가하여 배양 세포 시료의 리소좀 pH를 조절하고, 피펫으로 혼합한다. 로테이터에서 섭씨 37도에서 느린 속도로 30분 동안 배양합니다. 그런 다음 노화 관련 베타-갈락토시다아제를 염색하기 위해 세척하지 않고 밀리리터당 10마이크로그램의 DDAOG 원액을 샘플에 첨가합니다.

직사광선을 피한 상태에서 60분 동안 회전 장치에 놓습니다. 이전과 마찬가지로 튜브를 원심분리합니다. 상청액을 제거하고 PBS에서 얼음처럼 차가운 0.5% BSA 1밀리리터로 펠릿을 세척합니다. 그런 다음 300마이크로리터의 희석된 소성 바이올렛 450 AM 용액을 세척된 세포 펠릿에 첨가합니다. 어둠 속에서 얼음 위에서 15분 동안 배양합니다.

세포 샘플을 유세포 분석 기기 호환 튜브로 옮깁니다. 데이터 수집 소프트웨어에서 보라색 채널 히스토그램과 원적색 채널 대 녹색 채널 도트 플롯을 엽니다. 낮은 섭취 속도로 세포분석기 데이터 수집을 시작하고 DDAOG로 염색된 양성 대조군 샘플을 섭취 포트에 놓습니다. 샘플 데이터 수집을 시작합니다. 이벤트의 90% 이상이 각 플롯에 포함되도록 채널 전압을 조정합니다.

모든 설정이 최적이면 샘플당 10,000개의 이벤트를 기록합니다. DDAOG로 염색된 차량 전용 대조군 샘플을 흡기 포트에 놓습니다. 데이터 수집을 시작하고 샘플당 10,000개의 이벤트를 기록합니다. 양성 대조군에 비해 자가형광 또는 AF 및 DDAO 갈락토사이드 신호의 증가를 찾습니다. 샘플 데이터를 에 저장합니다. FCS 파일 형식을 사용하고 유세포 분석 소프트웨어가 장착된 워크스테이션 컴퓨터로 파일을 내보냅니다.

06:47

형광 현미경 검사 법에 의해 방사선-유도 Clonogenic 세포 죽음의 모드의 평가 위한 1 단계 프로토콜

관련 동영상

0 조회수

08:52

대사 표지 및 질량 분광법으로 노화 및 비분할 배양된 세포에서의 단백질 회전율 측정

관련 동영상

0 조회수

08:56

치료 유도 노인성 암 세포에서 다중 형광 노화 마커의 동시 이미징 및 유동 세포 측정 기반 검출

관련 동영상

0 조회수

09:18

노화 암 세포를 정량화하는 민감한 방법

관련 동영상

0 조회수

13:59

Oncogene 유도 노화 중 반응성 산소 종 및 정상적인 인간 섬유 아 세포에서 분 비 형 노화 관련의 정량적 측정

관련 동영상

0 조회수

07:39

SA-β-갈락토시다아제 계 선별 분석법

관련 동영상

0 조회수

10:03

암 줄기 세포를 표적으로 하는 반대로 신 생물 성 약 검열을 위한 생리학 환자 파생된 3D Spheroids

관련 동영상

0 조회수

13:53

Actinomycin D-Treated SiHa 자궁경부암 세포에서 세포사멸 바이오마커의 유세포 분석

관련 동영상

0 조회수

14:01

유세포분석을 통한 노화 종양 세포의 식별 및 농축을 위한 원적색 형광 노화 관련 β-갈락토시다아제 프로브

관련 동영상

0 조회수

12:19

암-면역 주기를 재현하기 위한 Co-Culture In Vitro 시스템

관련 동영상

0 조회수

마지막 업데이트: 1 8월 2026