Dispersion Assay를 통한 Biofilm 분해 검출

박테리아 생물막(보호 세포외 고분자 물질 또는 EPS 내에 캡슐화된 박테리아)이 포함된 멀티웰 플레이트로 시작합니다.

배지를 흡인하여 비부착 박테리아를 제거하고 세척합니다.

바이오필름 함유 웰을 완충액 단독, 포도당으로 완충액, 담즙염으로 완충액 또는 포도당과 담즙염으로 완충액으로 처리합니다.

완충액 및 포도당 처리는 생물막의 EPS를 분해하는 박테리아 효소의 방출을 지원합니다.

그 결과 생물막이 분해되어 박테리아가 방출됩니다.

담즙염과 담즙염 및 포도당 치료의 조합은 스트레스 상태를 모방하고 보호 EPS 내에 박테리아를 유지합니다.

각 웰에서 상청액을 신선한 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.

한천 플레이트에 희석된 상청액을 발견하고 배양합니다.

박테리아 콜로니를 열거하고 각 처리에 대한 박테리아 분산을 결정합니다.

담즙염 처리에 비해 완충액 및 포도당 처리의 분산도가 높다는 것은 생물막의 분해를 나타냅니다.

컨트롤 웰을 블랭크로 설정하여 플레이트 리더의 야간 생물막 플레이트의 OD₆₀₀ 값을 기록합니다. 다음으로, 플라스틱 표면의 부착 집단을 방해하지 않고 진공 라인을 사용하여 배양 배지를 흡인합니다. 200마이크로리터의 멸균 PBS로 웰을 두 번 부드럽게 세척합니다.

예열된 PBS 130마이크로리터에서 PBS로 세척한 후, 포도당이 포함된 PBS, 담즙염이 포함된 PBS, 담즙염 및 포도당이 포함된 PBS를 3개의 웰 각각에 세척합니다. 그런 다음 플레이트를 섭씨 37도에서 30분 동안 배양합니다. 30분 후 인큐베이터에서 플레이트를 꺼냅니다. 상청액을 신선한 멸균 96웰 플레이트로 피펫팅합니다.

마지막으로, 96웰 플레이트 또는 희석 블록에서 PBS로 상청액의 1-10회 연속 희석액을 준비합니다. 그런 다음 다중 채널 피펫을 사용하여 LB 한천 플레이트에 각 희석액 5마이크로리터를 옮깁니다. 플레이트를 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 다음날 식민지의 수를 세

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