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적절한 양이온성 중합체를 추가하고 중쇄 및 경쇄 항체 유전자를 위한 별도의 플라스미드 벡터를 추가하여 형질감염 혼합물을 준비합니다.
양전하를 띤 폴리머는 음전하를 띤 플라스미드와 결합하여 복합체를 형성합니다.
이 형질감염 혼합물을 무혈청 배지에서 인간 배아 신장 세포 배양액이 포함된 멀티웰 플레이트에 첨가하고 배양합니다.
복합체는 엔도사이토시스를 통해 세포에 들어가 엔도좀 팽창과 파열을 일으켜 세포질로 방출합니다.
양이온성 중합체는 핵막에 기공을 생성하여 벡터 진입을 촉진하고 전사를 가능하게 한 다음 중쇄 및 경쇄 단백질로 번역됩니다.
이 단백질은 소포체로 이동하며, 여기서 중쇄 단백질과 경쇄 단백질이 이량체화되고 이황화 결합에 의해 공유 결합되어 항체를 형성합니다.
항체는 추가적인 번역 후 변형을 위해 골지 장치로 이동하고 세포외 방출을 위해 소포로 포장됩니다.
방출된 항체가 포함된 배지를 수집합니다. 지속적인 항체 생성을 위해 무혈청 배지를 추가합니다.
보충된 DMEM에서 HEK 세포를 준비하고 75제곱센티미터 배양 플라스크에서 75% 컨플루언션으로 성장시킵니다. 각 중쇄/경쇄 형질감염에 대해 혈청 없이 1.75밀리리터의 DMEM과 혼합물을 준비합니다. 중쇄 벡터 4.5마이크로그램, 경쇄 벡터 3마이크로그램, 폴리에틸렌니민 용액 50마이크로리터를 포함합니다. 이 혼합물을 HEK 세포 플레이트에 부드럽게 첨가하고 플레이트 위에서 용액을 소용돌이칩니다.
플레이트를 밤새 배양한 다음 매일 배양 배지를 수집하기 시작하여 무혈청 배지로 교체합니다. 배지에는 항체가 포함되어 있으며 4일 동안 매일 수집할 수 있습니다.