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면역학
0 조회수 • 3:32 분 • July 8th, 2025
자연 살해 또는 NK 세포의 현탁액을 섭취하십시오.
항-CD20 단클론 항체를 첨가하고 배양합니다.
CD20 항원을 발현하는 표적 암세포가 없는 경우, 항체의 Fc 영역은 NK 세포 표면의 FcγRIIIa 수용체에 결합합니다.
배양 후 냉장 배지를 추가합니다. 원심분리하여 결합되지 않은 항체를 제거합니다.
다음으로 항인간 κ 경쇄 항체를 추가합니다. 인큐베이트.
이러한 2차 항체는 단클론 항체의 κ 경쇄에 결합합니다.
항체 가교는 표적 항원 결합을 모방하여 세포 내 신호 전달 캐스케이드를 유발합니다.
이것은 암세포가 없는 상태에서 NK 세포에 인위적인 자극을 일으킵니다.
활성화된 NK 세포는 세포골격 재배열을 거쳐 세포독성 과립을 방출합니다.
또한 세포는 케모카인과 사이토카인을 생성합니다.
원하는 시간 후에 냉각된 배지를 추가하여 세포 자극을 중지합니다.
튜브를 원심분리합니다. 항체 매개 이펙터 NK 세포 기능의 다운스트림 분석을 위해 상청액과 세포 펠릿을 수집합니다.
100마이크로리터의 재현탁된 자연 살해 세포를 1.5밀리리터 튜브 또는 96웰 U-바닥 플레이트에 분배하고 세포를 얼음 위에 놓습니다. 리툭시맙 또는 기타 관심 항체를 밀리리터당 100마이크로그램의 농도로 준비합니다.
밀리리터당 1마이크로그램의 최종 농도를 위해 각 세포 튜브에 1마이크로리터를 첨가하고 세포를 얼음 위에서 30분 동안 배양합니다. 배양하는 동안 밀리리터당 50마이크로그램의 농도로 배지에서 항인간 카파 경쇄 항체 용액을 준비합니다. 필요한 항체 용액의 양은 세포 샘플당 50마이크로리터입니다.
항체 용액을 열 블록 또는 수조에서 섭씨 37도까지 데웁니다. 세포의 배양이 완료되면 각 튜브에 얼음처럼 차가운 배지 1밀리리터를 넣고 세포를 135배 g 및 섭씨 4도에서 5분 동안 원심분리합니다. 얼음처럼 차가운 배지 1밀리리터로 세포를 다시 세척합니다. 마지막 세척 후 상청액을 흡인하고 50마이크로리터의 항인간 카파 경쇄 항체 용액을 첨가하여 세포를 활성화합니다. 즉시 세포 샘플을 섭씨 37도의 열 블록 또는 수조에 놓고 분석 또는 기타 절차를 위해 원하는 시점까지 배양합니다.
여러 샘플을 처리하는 가장 좋은 방법은 37도 수조에 플로팅 랙을 사용하는 것인데, 이를 제거하고 얼음 위에 올려 놓으면 모든 반응이 즉시 중단될 수 있습니다.