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면역학
0 조회수 • 2:53 분 • July 8th, 2025
항원 특이적 B 세포에서 복제된 항체 중쇄 또는 항체 경쇄를 암호화하는 진핵 발현 벡터를 예로 들어 보겠습니다.
음전하를 띤 벡터와 정전기적으로 상호 작용하여 폴리플렉스를 형성하는 양이온성 고분자인 폴리에틸레니민을 도입합니다.
포유류 세포를 세포에 부착하고 엔도사이토시스를 통해 내재화되는 폴리플렉스와 함께 배양합니다. 생성된 엔도좀은 리소좀과 융합됩니다.
폴리플렉스의 폴리머는 소포의 삼투압 팽창을 일으켜 벡터의 파열 및 방출을 유발합니다.
방출된 벡터는 핵으로 들어가 중쇄 및 경쇄 mRNA로 전사되며, 이는 소포체의 리보솜을 통해 번역됩니다.
생성된 펩타이드 사슬은 항체로 조립되어 골지체로 운반되어 분비 소포로 포장됩니다.
분비 소포와 세포막이 융합되면 항체는 세포외로 방출됩니다.
다운스트림 분석을 위해 항체 함유 상청액을 수확합니다.
형질감염 하루 전에 바닥이 평평한 96웰 플레이트의 각 웰에 10% 소 태아 혈청을 보충한 Dulbecco의 변형 이글 배지 200마이크로리터에 15,000개의 인간 배아 신장 세포를 시드합니다. 그런 다음 플레이트를 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소에서 밤새 배양합니다. 선형 폴리에틸렌이민 유도체 형질감염 시약을 사용하여 세포를 공동 전염감염시킵니다. 0.5마이크로리터의 DNA 형질감염 시약을 10마이크로리터의 150밀리몰 염화나트륨으로 희석합니다.
다음으로, 각 가변 중쇄 및 경쇄 발현 벡터 0.125마이크로그램을 10마이크로리터의 150밀리몰 염화나트륨에 희석합니다. 모든 희석액을 각각 10초 동안 소용돌이치게 합니다. 그런 다음 이전에 희석한 DNA 형질감염 시약을 10마이크로리터의 DNA 용액과 혼합합니다. DNA 형질감염 혼합물을 15초 동안 빠르게 소용돌이치고 실온에서 15분 동안 배양합니다.
DNA 형질감염 혼합물을 세포에 적가한 다음 플레이트를 부드럽게 소용돌이칩니다. 형질감염 후 16시간 후에 배지를 교체하고 섭씨 37도의 무혈청 배지에서 5일 동안 세포를 배양합니다.