Convection-Enhanced Delivery of Antibodies into a Mouse Brain(쥐 뇌로의 항체 전달)

개골 정중선 절개가 있는 마취된 마우스를 정위 프레임에 고정합니다.

두개골의 기준점인 브레그마를 감지하고 주입 위치를 결정합니다.

뇌를 덮고 있는 경막의 손상을 방지하기 위해 해당 위치에 버 구멍을 만듭니다.

항체가 적힌 스텝 카테터를 정위 로봇에 장착하고 주입 펌프에 연결합니다.

카테터는 금속 바늘에서 돌출된 용융 실리카 모세관으로 구성되어 융합 지점에 계단식 외경을 생성합니다.

카테터를 뇌 실질에 삽입합니다. 주입 펌프를 시작하여 카테터 개구부에 압력 구배를 생성하고 제어된 속도로 항체를 전달하는데, 이는 대류 강화 전달로 알려진 기술입니다.

계단식 직경은 조직을 압축하여 밀봉을 만듭니다.

씰은 체액 역류를 방지하고 조직 손상 위험을 낮추면서 많은 항체 부피를 분배할 수 있습니다.

쥐 선조체에 항체 주입을 위해, 마취 된 마우스에서 피부 꼬집기에 반응하지 않는 것을 확인하고, 헤어 트리머로 머리를 깎는다. 요오드 용액에 적신 면봉으로 피부를 소독하십시오.

메스를 사용하여 두개골 정중선을 따라 눈높이에서 마무리하는 10mm 피부 절개를 합니다. 코 클램프와 이어바를 사용하여 마우스를 정위 프레임에 고정하고 두개골 표면이 수평이고 단단히 고정되도록 주의하십시오.

사기를 정위 로봇에 놓고 드릴 비트를 기준점의 카테터 끝과 동기화합니다. 겸자를 사용하여 피부를 후퇴시키고 두개골 표면의 브레그마를 국소화합니다. 드릴 비트 끝을 사용하여 소프트웨어에서 브레그마를 참조하고 드릴을 브레그마 위치에서 정면 1mm, 측면 2mm로 이동합니다.

경막이 손상되지 않도록 주의하면서 버 구멍을 뚫고 주사기를 버 구멍 위로 움직입니다. 카테터에 기포가 남지 않도록 주사기에서 0.5-1마이크로리터를 분배합니다. 시연된 대로 대류 강화 전달을 시작하고 주사 지점에서 유체 역류의 흔적이 있는지 두개골 표면을 관찰합니다.

전달 및 카테터 제거가 끝나면 분당 0.2마이크로리터로 주입 펌프를 시작하여 주사 중 카테터 막힘의 증거가 있는지 확인합니다. 막힘이 발생하지 않으면 카테터 팁에서 주사 혼합물 방울이 즉시 관찰되어야 합니다.