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면역학
0 조회수 • 2:28 분 • July 8th, 2025
항체 결합 박테리아 단백질인 고정화된 단백질 A가 포함된 다공성 유리 수지가 포함된 FPLC 컬럼을 가져 가십시오. 중성 pH 완충액으로 컬럼을 평형화합니다.
단클론 항체와 오염 단백질 및 DNA를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소 세포에서 채취한 세포 배양액을 추가합니다.
단백질 A는 항체의 Fc 영역에 결합하여 고정시킵니다.
일부 오염 물질은 수지에 비특이적으로 부착되고 나머지는 통과합니다.
크로마토그램에서 시료 로딩 중 UV 흡광도가 증가하면 유동 중 단백질 농도가 높다는 것을 나타냅니다.
평형 완충액으로 세척하여 흡광도 감소로 표시되는 결합되지 않은 오염 물질을 제거합니다.
고염 완충액으로 세척하여 비특이적 상호 작용을 방해하고 작은 불순물 피크로 표시되는 오염 물질을 제거합니다.
낮은 pH 용출 완충액을 추가하여 단백질 A-항체 상호작용을 방해하고 해당 피크를 추적하여 수집된 항체를 용리합니다.
분해를 방지하기 위해 수집된 항체의 pH를 중화합니다.
정제 시스템에 부착된 소프트웨어를 열고 정제된 항체 용출액을 수집하기 위해 15밀리리터 원뿔형 튜브를 배치하고, 고염 세척 중 유동을 분획 수집기로 수집하기 위해 50밀리리터 원뿔형 튜브를 배치하는 것으로 시작합니다.
다음으로, 0.22마이크로미터 기공 여과된 수확된 세포 배양액을 뚜껑이 있는 빈 12밀리리터 주사기에 추가합니다. 캡을 제거한 후 주사기 노즐을 정제 시스템의 수동 주입 포트에 삽입합니다. 주사기를 비틀어 제자리에 조이고 샘플의 전체 부피가 주입되고 부착된 10밀리리터 대용량 샘플 루프에서 볼 수 있을 때까지 플런저를 누릅니다.
저장된 방법을 선택하고 기기 소프트웨어에서 메시지가 표시되면 실행을 클릭합니다. 항체가 모두 용리되면 정제된 단백질을 1몰 트리스 염기로 즉시 약 5.5의 pH로 중화합니다.
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