호흡기 세포융합 바이러스에 특이적인 중화항체 역가를 측정하기 위한 분석

호흡기 세포융합 바이러스 또는 RSV 특이적 중화 항체를 함유한 연속적으로 희석된 열 비활성화 인간 혈청을 복용하십시오.

바이러스 현탁액을 추가합니다. 항체는 희석 의존적 방식으로 바이러스를 중화합니다.

혼합물을 인간 상피 세포 단층에 도입하고 바이러스 흡착을 위해 배양합니다.

혼합물을 버리십시오. 카르복시메틸셀룰로오스 함유 배지를 첨가하여 반고체 오버레이를 형성합니다. 인큐베이트.

RSV는 숙주 세포 기계를 활용하여 바이러스 RNA와 단백질을 합성하고, 이후에는 개별 비리온으로 조립되고 싹이 틔웁니다.

감염된 세포는 결국 죽습니다. 카르복시메틸셀룰로오스는 바이러스의 이동을 제한하여 국소 감염과 세포 사멸을 일으켜 플라크를 형성합니다.

오버레이를 제거합니다.

아세톤 함유 완충액으로 세포를 고정합니다. 세포를 투과화하고 비특이적 항체 상호작용을 방지하기 위해 세제 함유 차단 완충액을 도입합니다.

바이러스 단백질을 표적으로 하는 1차 항체를 추가합니다.

1차 항체를 표적으로 하는 형광단 접합 2차 항체와 오버레이.

형광 플라크를 정량화하기 위해 웰을 이미지

화합니다.

RSV의 50%를 중화하는 가장 높은 혈청 희석액은 중화 역가를 나타냅니다.

A549 세포에 RSV를 접종하기 전에 광학 현미경으로 세포 플레이트를 검사하여 A549 세포 단층이 80% 합류하는지 확인합니다. 그런 다음 플레이트를 부드럽게 뒤집어 미디어를 버리고 멸균 흡수성 종이 타월에 플레이트를 가볍게 닦아냅니다. 여과된 멸균 PBS로 세척할 때마다 세척합니다.

다음으로, 원고에 제공된 플레이트 템플릿에 따라 A549 세포 플레이트의 해당 웰에 웰당 100마이크로리터의 바이러스-혈청 혼합물을 추가하고 플레이트를 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소에 1시간 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 피펫을 사용하여 웰당 90마이크로리터를 제거하고 1X M 199, 1.5% CMC 및 2% FCS 및 페니실린-스트렙토마이신 혼합물을 포함하는 배지 100마이크로리터를 추가합니다. 플레이트를 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소에 3일 동안 배양합니다.

분석 플레이트를 고정하고 개발하려면 먼저 RSV에 감염된 A549 세포 플레이트를 부드럽게 뒤집어 M 199, CMC, 2% FCS 및 페니실린-스트렙토마이신 혼합물이 포함된 배지를 폐기합니다. 그런 다음 각 웰에 200마이크로리터의 고정 완충액을 천천히 첨가합니다. 플레이트를 섭씨 영하 20도에서 20분 동안 배양합니다. 그런